肝癌石蜡包埋组织miRNA提取方法的优化

来源 :重庆医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luzb2009
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目的改进并优化从肝癌(HCC)甲醛固定石蜡包埋组织(FFPE)提取并检测微小RNA(miRNA)的方法。方法使用miRNeasy FFPE试剂盒探讨提取HCC石蜡组织miRNA最佳切片厚度及蛋白酶K作用时间。实时定量RT-PCR检测miR-221、miR-146a、let7-a、miR-191、miR-103及RNU6B的表达量。将HCC细胞制成石蜡组织,对比同一细胞系新鲜细胞及石蜡包埋细胞的各个miRNA表达量差异。结果切片厚度30μm,蛋白酶K作用时间48h时提取miRNA效果最佳。各HCC细胞系及临床HCC石蜡组织均有不同水平的miRNA-221、miR-146a、let7-a、miR-191、miR-103及RNU6B表达。同一细胞系新鲜细胞与石蜡包埋后的各miRNA表达无明显差别。结论改良后的miRNeasy FFPE提取方法能提取石蜡组织中的miRNA,可重复性强,可推广用于临床各种石蜡包埋组织的miRNA提取。
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