【摘 要】
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目的 建立针对PCV3的操作简单、重复性好、灵敏度较高的检测方法. 方法 利用PCR方法扩增PCV3保守区基因片段(312 bp),将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-PCV3作为阳
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉133002;温州大学病毒学研究所;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所;吉林大学动物医学院;吉林农业大学动物科技学院;延边大学农学院,吉林延吉,133002
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目的 建立针对PCV3的操作简单、重复性好、灵敏度较高的检测方法. 方法 利用PCR方法扩增PCV3保守区基因片段(312 bp),将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-PCV3作为阳性标准品质粒.优化反应条件,建立定量检测PCV3的实时荧光定量PCR方法,并进行敏感性、特异性和重复性验证. 结果 建立的SYBRGreen Ⅰ Real-time PCR方法的Ct值与标准品模板在4.24×101～4.24×108拷贝/μl范围内呈良好线性关系,其相关系数为0.996,斜率为-4.384.该方法特异性强,与PRRSV、FMDV、JEV、PCV2及PRV均无交叉反应;敏感性为4.24×101拷贝/μl,比常规PCR方法高10倍;组间和组内重复试验的变异系数均小于2％.利用实时荧光定量PCR方法对采集的155份猪肺组织进行检测,阳性率为36.13％,高于普通PCR阳性检出率的32.25％. 结论 建立的PCV3SYBR GreenⅠ Real-time PCR方法敏感、特异,可用于猪体PCV3感染的快速检测.
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