论文部分内容阅读
目的:探讨常用补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用.方法:采用水提醇沉法制备淫羊藿、仙茅、巴戟天、肉苁蓉、杜仲、菟丝子、补骨脂、知母、黄柏、生地黄、六味地黄丸和金匮肾气丸等常用补肾中药和复方的提取物.①分别以不同浓度(0、2、4、8、16、31、63、125、250、500、1 000 μg/ml)的补肾中药或复方干预细胞48 h,MTT法检测Y1细胞增殖的情况,筛选各单味中药和复方的适宜浓度.②将细胞分为对照组、模型组和中药(复方)组.除对照组外,其他各组Y1细胞给予10 μmol/L氢化可的松和5 μmol/L H89(促肾上腺皮质激素信号阻断剂)诱导模型;造模同时,各中药(复方)组给予相应提取物.药物干预48 h后,PCR检测类固醇合成急性调节蛋白(Star)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21α-羟化酶1(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶1(Hsd3b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶2(Hsd3b2)等mRNA表达;Western blot检测StAR、CYP11A1、CYP11B1、3β-HSD1、3β-HSD2的蛋白表达;ELISA检测细胞培养液皮质酮含量.结果:①MTT检测结果显示,黄柏对Y1细胞增殖具有明显的抑制作用.筛选出的适宜药物浓度分别为黄柏10 μg/ml、知母100 μg/ml、其他中药(复方)200 μg/ml.②各单味中药和复方干预模型细胞48 h后,PCR检测结果显示,淫羊藿、仙茅、黄柏和生地黄对皮质酮合成的相关基因影响较显著.③与对照组相比,模型组Star、Cyp21a1的mRNA表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,生地黄组Cyp21a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P＜0.01);仙茅组Cyp21a1、Cyp11a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P＜0.01);淫羊藿组Star和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P＜0.05,P＜0.01),Cyp21a1 mRNA表达显著降低(P＜0.01);黄柏组Cyp21a1、Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P＜0.01).④与模型组相比,仙茅组3β-HSD2蛋白表达显著降低(P＜0.01),黄柏组StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01),3β-HSD1蛋白表达显著升高(P＜0.01).⑤与模型组相比,仙茅、淫羊藿、黄柏作用后皮质酮含量显著降低(P＜0.01).结论:大剂量氢化可的松可诱导Y1细胞培养液皮质酮含量显著升高.补肾中药淫羊藿对模型细胞的皮质酮合成具有促进作用,可上调Star和Hsd3b1基因表达;而黄柏则具有抑制作用,可下调StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达,降低皮质酮含量.