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[目的]利用TALENs技术定向敲除烟草eIF4E-6基因,为提高优质烤烟品种K326的马铃薯Y病毒（PVY）抗性提供材料。[方法]构建特异靶向烟草eIF4E-基因的TALENs载体,并由农杆菌介导转化K326烟草,用PCR和克隆测序方法筛选目的基因被成功编辑的T0代转基因烟株。[结果]构建了2个特异靶向eIF4E-6基因的TALENs载体T3和T4。2个载体各获得了约40和50株阳性转化的K326 T0代烟株。T3载体获得1株目的基因靶位点发生大片段碱基缺失的杂合突变型T0代单株、3株靶位点发生碱基替换