人MeCP2基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

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目的 构建针对人甲基化结合蛋白MeCP2的shRNA真核表达质粒,稳定转染肺腺癌细胞A-549观察其对MeCP2表达的影响。方法 根据MeCP2的mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,PCR、测序鉴定插入成功,且插入方向正确。转染A-549细胞,观察其在mRNA和蛋白水平对MeCP2的影响。结果 成功构建两个MeCP2的shRNA真核表达质粒,并稳定转染到肺癌细胞A-549中,两个真核表达质粒在mRNA水平和蛋白水平对MeCP2
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