【摘 要】
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目的:探究miR-101a在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝纤维化患者中的表达及对肝星状细胞(HSC)的影响.方法:根据肝纤维化程度将HBV相关性肝纤维化患者进行分组(S0组、S1组、S2组、S
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院肝胆外科 陕西西安710061
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目的:探究miR-101a在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝纤维化患者中的表达及对肝星状细胞(HSC)的影响.方法:根据肝纤维化程度将HBV相关性肝纤维化患者进行分组(S0组、S1组、S2组、S3组和S4组),健康受试者作为健康对照组.通过RT-PCR检测肺组织中miR-101a的表达,并分析miR-101a与疾病严重程度的关系.使用重组人TGF-β1处理人肝星状细胞系LX-2,并对LX-2细胞转染阴性对照miRNA模拟物(NC-mimic组)、miR-101a模拟物(miR-101a-mimic组)、阴性对照miRNA抑制剂(NC-in-hibitor组)或miR-101a抑制剂(miR-101a-inhibitor组),未转染的细胞作为对照组,然后通过RT-PCR或蛋白质印迹检测激活HSC 及 ECM 产生的关键基因(α-SMA、COL1A1、COL1A2和 COL3A1)和蛋白(a-SMA、collagen Ⅰ 和 collagen Ⅲ)的表达水平.将SD大鼠随机分为4组:对照组、CC14组、Ad-control组和Ad-miR-101a组,对大鼠腹腔注射CCl4(1 mL/kg体重)诱导肝纤维化模型,每周3次,共4周.然后将5×109感染单位的携带miR-101a的重组腺病毒(Ad-miR-101a)或对照腺病毒(Ad-control)经尾静脉注射到大鼠中.4周后,通过苏木精和伊红(H&E)和Masson三色染色评估肝脏形态和纤维化,通过免疫组化染色评估肝脏α-SMA、E-cadherin、vimentin、Smad4或p-Smad2/3的表达.结果:与健康受试者相比,HBV相关肝纤维化患者肝组织中miR-101a的表达水平明显降低,并且miR-101a的表达水平随着患者的严重程度升高而降低(P＜0.05).与未处理的细胞相比,miR-101a在TGF-β1处理的LX-2细胞中以浓度和时间依赖性方式显著下降(P＜0.05).与未处理的细胞相比,5 ng/mLTGF-β1处理LX-2细胞中的α-SMA、COL1 A1、COL1 A2和 COL3A1 mRNA 表达水平及 a-SMA、collagen Ⅰ 和 collagen Ⅲ蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05).与对照组相比,miR-101a-mimic 组的 α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1 和 TGF-β1 mRNA 和 a-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白表达均下调(P＜0.05).与对照组相比,Ad-miR-101a组大鼠肝组织中E-cadherin的表达上调,但α-SMA、vimentin、Smad4和p-Smad2/3的表达下调(P＜0.05);Ad-miR-101a组大鼠的肝组织形态基本恢复正常,肝组织纤维化程度低于CC14组.结论:miR-101a水平与乙型肝炎病毒相关性肝纤维化严重程度相关,上调miR-101a可能通过抑制HSC的活化及上皮间质转化发挥抗纤维化作用.
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