青稞类钙调素蛋白基因CML19的克隆、序列分析及原核表达

• 作 者: 韦泽秀 原红军 扎桑 王玉林 徐齐君 曾兴权 尼
• 机 构: 西藏自治区农牧科学院农业资源与环境研究所,省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室,西藏自治区农牧科学院农业研究所,西藏自治区农牧科学院
• 出 处: 西北农业学报
• 发表日期: 2018年07期
• 关键词: 青稞 类钙调素蛋白 CML19 序列分析 原核表达
• 基金项目: 西藏财政专项(2017CZZX001/2);西藏科技重大专项(Z2016B01N01);Tibet Finance Special(No.2017CZZX001/2);Tibet Science and Technology Major Special(No.Z2016B01N01)

根据鉴定得到青稞类钙调素蛋白基因CML19的序列设计引物,以青稞叶片的cDNA为模板,扩增得到目的片段,对目的基因序列进行鉴定和分析,进一步构建该基因的原核表达载体pET28a-CML19,转入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导外源蛋白质表达并检测。结果表明,扩增得到CML19的CDS序列全长为447 bp,编码的蛋白质含有148个氨基酸,分子质量为16.46 ku,理论等电点(PI)为4.40,总平均亲水性(GRAVY)为-0.176,不稳定系数为49.59,存在典型的EF手结构域;系统进化分析表明,青稞CML19与山羊草具有较近的亲缘关系;原核表达蛋白结果显示,重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。初步阐明青稞CML19基因的序列特征,为进一步制备抗体、探讨CML19基因的功能奠定基础。