【摘 要】
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目的 构建人miR-378慢病毒表达载体.方法 酶切法从已构建的质粒获得pri-miR-378,克隆于含绿色荧光蛋白( GFP)编码基因的PGCSIL载体,转化感受态细胞,产生重组慢病毒质粒PGCSIL
【机 构】
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苏州大学附属第四医院肿瘤研究所,江苏省,214062;江苏省寄生虫病防治研究所;无锡市传染病医院肝病科
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目的 构建人miR-378慢病毒表达载体.方法 酶切法从已构建的质粒获得pri-miR-378,克隆于含绿色荧光蛋白( GFP)编码基因的PGCSIL载体,转化感受态细胞,产生重组慢病毒质粒PGCSIL- miR-378,并进行PCR及测序鉴定.将PGCSIL- miR-378、pHelper 1.0和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平用逐孔稀释滴度法测定病毒滴度.结果 成功构建miR-378的慢病毒表达载体,测序证实所插入基因序列完全正确.荧光显微镜检测证实PGCSIL-miR378携有正确的miR-378基因,并能在293T细胞中表达.检测病毒滴度为8×108 TU/ml.结论 成功建立了miR-378慢病毒表达系统.
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