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目的检测叶酸/聚酰胺-胺(FA/PAMAM)作为miR-7基因载体的细胞转染效率及其胶质瘤靶向功能,为研发高效小分子靶向投递药物奠定基础。方法透析法制备FA/PAMAM络合物,透射电子显微镜观察粒子形貌;以其为载体转染miR-7至人脑胶质瘤细胞系U251,荧光显微镜观察络合物转染效率,qRT-PCR方法检测miR-7水平;制作去胸腺小鼠颅内U251胶质瘤模型,分别经尾静脉、颈内动脉及肿瘤原位进行络合物移植,48 h后取脑制作冰冻切片,荧光显微镜观察络合物在肿瘤内的聚集程度;蛋白印记(Western blot)法检测miR-7靶基因EGFR和细胞增殖活性抗原(PCNA)的蛋白表达。结果粒子形貌规整,与U251细胞共培养48 h后可获得高效转染,并显著提高miR-7水平。经尾静脉、颈内动脉及肿瘤原位三种途径移植后获得的冰冻切片中均可发现络合物粒子在肿瘤部位的聚集,但聚集程度为尾静脉<颈内动脉<肿瘤原位。Western blot结果示EGFR和PCNA水平较对照组均有不同程度下降(P<0.05)。结论 FA/PAMAM能够高效投递miR-7基因至体内、外胶质瘤细胞,有望成为一种新的高效小分子靶向投递药物进行胶质瘤基因治疗。
Objective To detect the transfection efficiency of folic acid / polyamide-amine (FA / PAMAM) as a miR-7 gene vector and its glioma targeting function, and lay a foundation for the development of efficient small molecule targeted delivery drug. METHODS FA / PAMAM complex was prepared by dialysis and the morphology of the particles was observed by transmission electron microscopy. MiR-7 was transfected into human glioma cell line U251 by transmission electron microscopy. The transfection efficiency of qRT- PCR method was used to detect the level of miR-7. The intracranial U251 glioma model was established in the thymus thymus mice. The tail vein, internal carotid artery and tumor in situ were respectively transplanted into the complex. After 48 h, The degree of aggregation of the complex in the tumor was observed. The protein expression of EGFR and PCNA in miR-7 was detected by Western blot. Results The morphology of the particles was regular. After being co-cultured with U251 cells for 48 h, efficient transfection was achieved and the level of miR-7 was significantly increased. Through the tail vein, internal carotid artery and tumor in situ three pathways obtained after transplantation frozen particles can be found in the accumulation of complex particles in the tumor site, but the degree of aggregation tail vein
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