【摘 要】
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目的利用兔去上皮角膜模型,研究血小板活化因子(PAF)对角膜伤口愈合的作用及其分子生物学机制.方法离体角膜上做正中直径7 mm 圆形去上皮角膜伤口.去上皮角膜分为3组,即对照
【机 构】
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大连医科大学第一临床学院眼科,Department of Ophthalmology
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目的利用兔去上皮角膜模型,研究血小板活化因子(PAF)对角膜伤口愈合的作用及其分子生物学机制.方法离体角膜上做正中直径7 mm 圆形去上皮角膜伤口.去上皮角膜分为3组,即对照、PAF及BN (PAF拮抗剂) 组,培养48 h后,行角膜上皮染色观察伤口愈合状况.分别对兔角膜上皮 (RCE) 和角膜基质 (RCK) 细胞进行体外传代培养,RCE和RCK细胞经PAF 和(或) BN处理,培养24 h,提纯RNA.应用RT-PCR及核酸杂交技术分别检测肝细胞生长因子 (HGF)、角质形成生长因子(KGF)及表皮生长因子(EGF)基因在RCK和RCE细胞及HGF受体 (HGF-R) 基因在RCE细胞中的表达强度.分别应用CyQUANT荧光结合和Boyden 小房技术检测PAF对RCE细胞黏附、增殖和迁徙的影响. 结果 PAF (100 nmol/L) 明显抑制角膜上皮伤口愈合,48 h对照、PAF和BN组角膜上皮未愈合面积经电脑图像分析分别为:(6.0±1.5) U、(58.0±7.0) U和(5.0±1.0) U.PAF明显增强RCE细胞黏附作用,对照、PAF和BN组每96孔板贴附细胞数荧光光度平均值分别为:3696±372、7908±671 和3487±324.RT-PCR结果显示:PAF使 HGF mRNA在RCK的表达强度降低4.1倍,同时明显减弱HGF-R在RCE细胞中的表达,核酸杂交实验证实PCR结果.结论 PAF明显增强RCE细胞的黏附作用,明显抑制HGF mRNA在角膜基质细胞和HGF-R基因在角膜上皮细胞中的表达强度,进而抑制去上皮角膜伤口愈合.PAF受体拮抗剂BN明显抑制PAF的上述作用,阻止PAF致角膜伤口的迟愈合.(中华眼科杂志,2004,40:151-155)
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