目的 以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷（5-Zac）对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1（PD-1）基因肩动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系.方法 以不同浓度的5-Zac（0、5、10μmoL/L）作用于体外培养的Molt-4细胞72 h,流式细胞术（FCM）检测细胞表面表达PD-1的Molt-4细胞比例和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测5-Zac作用后PD-1基因mRNA的转录水平;亚硫酸氧钠处理各组Molt-4细胞DNA,PCR扩增与转录因子Brn-2结合的PD-1启动子基因片段,转化感受态大肠杆菌,挑克隆测序,检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态.结果 0、5、10μmol/L的5-Zac作用于Molt-4细胞72 h后,PD-1在细胞表面的表达率分别为1.13%4±0.01%、18.96%±1.87%、63.09%±6.25%,并呈现浓度依赖性（P〈0.05）;PD-1基因mRNA表达量显著增加;细胞凋亡检测结果显示与未处理组相比,5-Zac处理72 h后Molt-4细胞的凋亡率显著增加,3组凋亡率分别为1.9%4±0.06%、8.98%4±1.36%、24.5%4±3.68%,差异有统计学意义（P〈0.01）;3组DNA亚硫酸氢钠测序结果表明,5-Zac处理后,与转录因子Bin-2结合位置的CG点明显受到去基化影响,其去甲基化概率与周围其他CG点去甲基化概率比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 甲基化抑制剂5-Zac可导致体外培养的淋巴细胞系Molt-4细胞表面PD-1表达显著增加,PD-1基因mRNA表达增加,细胞凋亡率增高;PD-1基因活化和表达的增加可能与5-Zac降低PD-1基因启动子上与转录因子Bin-2结合位置的CG点甲基化水平,从而促进Brn-2与基因启动子结合,使转录表达增加有关。
5-杂氮胞苷诱导人淋巴细胞系Moh4细胞PD-1基因启动子去甲基化及PD-1蛋白表达的影响
【摘 要】
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目的 以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷（5-Zac）对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1（PD-1）基因肩动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系.方法 以不同浓度的5-Zac（0、5、10μmoL/L）作用于体外培养的Molt-4细胞72 h,流式细胞术（FCM）检测细胞表面表达PD-1的Molt-4细
【机 构】
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中南大学湘雅二医院感染科,长沙410001,中南大学湘雅二医院感染科,长沙410001,中南大学湘雅二医院表观遗传学研究中心,中南大学湘雅医院血液科实验室,中南大学湘雅二医院感染科,长沙410001,
【出 处】
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中华微生物学和免疫学杂志
【发表日期】
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2011年31期
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