P物质调控肥大细胞脱颗粒的实验研究

• 作 者: 程冯丽 李秋婷 赵长青 安云芳 祁雪萍
• 机 构: 030001 太原，山西医科大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科,041000 临汾市人民医院耳鼻咽喉头颈外科,030001 太原，山西医科大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科,030001 太原，山西医科大学第二医
• 出 处: 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 发表日期: 2016年51期
• 关键词: 肥大细胞 P物质 受体 白细胞介素-4

目的

利用体外诱导小鼠骨髓细胞获得的高纯度肥大细胞(mast cells，MC)，探讨白细胞介素(IL)4参与诱导获得的MC中神经激肽受体1(neurokinin receptor 1，NK－1R)和Fc段受体Ⅰα(FcεRⅠα)的表达情况；建立神经肽P物质(substance P，SP)介导的MC脱颗粒模型，初步探讨SP除通过其特异性受体NK－1R调控MC脱颗粒外，是否还存在FcεRⅠα介导的途径。

方法

从BALB/c小鼠股骨提取骨髓细胞于RPMI 1640完全培养基中，分不同浓度IL－4诱导组即100 μg/L干细胞因子(stem cell factor，SCF)、15 μg/L IL－3以及0、10、15、20、25 μg/L IL－4中进行体外培养。每周换液，将悬浮细胞移入新的培养体系。倒置显微镜观察并记录细胞生长情况。4周后收集各组细胞及上清液，进行甲苯胺蓝染色、流式细胞术检测CD117鉴定MC，流式细胞术以及蛋白印迹Western blot法分析不同组骨髓MC中FcεRⅠα和NK－1R的表达情况。经鉴定培养成功的骨髓MC中分别加入不同浓度的SP(0、0.01、0.1、1.0、10.0 mg/L)孵育0.5 h，检测上清液和细胞内组胺含量，计算组胺释放率。

结果

不同浓度IL－4(0、10、15、20、25 μg/L)诱导获得MC表面CD117的阳性率分别为(94.8±1.3)%、(95.7±2.5)%、(94.1±1.3)%、(96.6±1.0)%、(96.6±1.1)%，各组比较差异无统计学意义(F＝8.51, P>0.05)；FcεRⅠα的阳性率分别为(81.5±2.6)%、(84.2±1.8)%、(91.8±2.0)%、(91.6±1.6)%、(93.0±2.6)%，各组比较差异有统计学意义(F＝15.76, P<0.05)。不同浓度SP(0、0.01、0.1、1.0、10 mg/L)刺激，20 μg/L IL－4诱导组MC释放组胺含量分别为(20.08±1.50)%、(32.76±2.99)%、(42.90±3.36)%、(50.21±1.29)%、(56.10±3.60)%，对照组分别为(19.37±2.02)%、(19.50±1.50)%、(21.77±1.91)%、(32.00±2.50)%、(33.56±1.25)%，各组间比较差异有统计学意义(P值均<0.05)。20 μg/L IL－4诱导组MC表面FcεRⅠα和NK－1R表达为最佳状态。此时低浓度SP(0.01 mg/L)激活进而发生脱颗粒，其组胺释放率与SP浓度呈正相关；0 μg/L IL－4诱导组表达FcεRⅠα，几乎不表达NK－1R，此时在高浓度SP(1.0 mg/L)作用时MC仍可产生应答。

结论

骨髓细胞在SCF、IL－3或SCF、IL－3和IL－4诱导下均可定向分化为MC。而经IL－4参与诱导时可促使骨髓MC高表达FcεRⅠα和NK－1R，成功建立SP介导的MC脱颗粒模型。SP调控MC脱颗粒存在其特异性受体NK－1R介导的非免疫性及FcεRⅠα介导的免疫性双途径。