【摘 要】
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目的 建立FTA-PCR方法,并应用于水源中隐孢子虫污染的基因检测.方法 用免疫磁珠(IMS)分离纯化隐孢子卵囊,采用FTA卡提取隐孢子卵囊DNA,根据隐孢子虫18 S rRNA的基因序列设计
【机 构】
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上海市疾病预防控制中心,上海,200336
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目的 建立FTA-PCR方法,并应用于水源中隐孢子虫污染的基因检测.方法 用免疫磁珠(IMS)分离纯化隐孢子卵囊,采用FTA卡提取隐孢子卵囊DNA,根据隐孢子虫18 S rRNA的基因序列设计引物,对模板DNA进行PCR扩增,同时以刚地弓形虫、猪人肉孢子虫、细粒棘球蚴和华支睾吸虫等DNA样本作对照.用琼脂糖电泳和溴乙腚染色对PCR产物进行检测.结果 微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和贝氏隐孢子虫均扩增出446 bp左右的DNA片段,其他对照DNA样本均未出现扩增反应.应用FTA-PCR检测上海市5个区自来水10份,未出现特异性条带;检测15份水源水、25份黄浦江水、15份动物饲养场周边河水、9份污水处理厂出水和6份生活污水排污口水,分别检测出0、2、5、1份和1份共9份阳性,阳性样品均扩增出约446 bp的特异性片段.结论 FTA-PCR可用于水样中隐孢子虫污染的基因检测.动物饲养场周边河水受隐孢子虫污染程度较高.
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