【摘 要】
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以我国抗病、优质、丰产的棉花优良品种中棉所12号为材料,对棉花细菌人工染色体(BAC)文库构建过程中的一些关键技术,如plug的制备、DNA的部分消化、酶切片段的选择、插入片段
【机 构】
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河北农业大学河北省作物种质资源重点实验室,保定,071001澳大利亚联邦科学与工业研究组织植物研究所,布里斯本,4067;
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以我国抗病、优质、丰产的棉花优良品种中棉所12号为材料,对棉花细菌人工染色体(BAC)文库构建过程中的一些关键技术,如plug的制备、DNA的部分消化、酶切片段的选择、插入片段与载体的摩尔比值、连接产物的浓缩等进行了研究,建立了构建棉花BAC文库的适宜方法体系.依照该方法初步构建了含有38000个克隆的棉花BAC文库.经检测,插入片段平均大小约为120kb,蓝斑率小于0.5%,空载率小于1%.插入片段与载体的最适摩尔比为1:15,一次转化可以获得约2000个克隆,cfu·μl-1高达4.该方法为进一步构建中棉所12号多倍基因组的BAC文库、从而进行棉花基因组有关研究奠定了基础.
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