实时荧光定量PCR确定儿童和青少年髓母细胞瘤分子亚型的准确性分析

• 作 者: 张晶 李春德 刘丕楠 李朋 李仕维 张顺 赵赤 赵赋
• 机 构: 100050首都医科大学，北京市神经外科研究所,首都医科大学附属北京天坛医院神经外科,首都医科大学附属北京天坛医院神经外科,首都医科大学附属北京天坛医院神经外科,首都医科大学附属北京天坛医院神经外科,
• 出 处: 中华神经外科杂志
• 发表日期: 2016年32期
• 关键词: 髓母细胞瘤 分子亚型 儿童 青少年 聚合酶链反应 免疫组织化学

目的

探讨实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)诊断儿童和青少年髓母细胞瘤分子亚型的可靠性。

方法

回顾性纳入首都医科大学附属北京天坛医院神经外科2011年1月至2015年12月经病理学确诊为髓母细胞瘤的患者30例。采用RT-qPCR方法对肿瘤的冰冻样本进行检测，选取11个分子亚型特征性标记基因(OTX2、FOXG1B、MYC、DKK1、WIF1、DKK2、MYCN、SFRP1、HHIP、OTX1、NPR3)，依据基因表达水平差异进行无监督聚类分析和微列阵预测分析，并绘制热图和重心图；结合表达谱芯片和免疫组化方法进行验证，采用单因素方差分析分子亚型间标记基因表达值的差异，分析分子亚型临床因素分布的差异。

结果

采用RT-qPCR方法可将30例髓母细胞瘤患者分成4个分子亚型，其中SHH亚型17例，WNT亚型4例，Group 3亚型4例，Group 4亚型5例，分型结果与免疫组织化学染色结果和无监督聚类分析结果完全一致；在各个亚型间，11个特征性标记基因的表达差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)，其中SFRP1、MYCN、NPR3及MYC是区别亚型的关键基因；SHH亚型和WNT亚型在性别分布上(男∶女分别为4.7 ∶1.0和1 ∶3)、诊断年龄上(≤3岁∶3～16岁分别为1.0 ∶4.7和3 ∶1)，差异均有统计学意义(均P＝0.022)。

结论

RT-qPCR方法能准确确定儿童和青少年髓母细胞瘤的4个分子亚型。