泛素化调节因子2真核表达质粒的构建及其在原代肾小管上皮细胞的表达

• 作 者: 高磊 赵海焦 吴金栋 田娅慧 张中文 吴国娟
• 机 构: 北京农学院动物科学技术学院
• 出 处: 中国畜牧兽医
• 发表日期: 2013年6期
• 关键词: 泛素化调节因子2 pEGFP-N3 小鼠肾小管上皮细胞 质粒 表达 Smad ubiquitination regulatory factor 2pEGFP-N
• 基金项目: 国家自然科学基金（31172362、30972215）, 北京市自然科学基金（5102014）, 北京市人才强教深化计划（教学创新人才）

本试验旨在构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因泛素化调节因子2（Smurf2）的真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,并转染小鼠肾小管上皮细胞检测其表达情况。用RT-PCR法扩增小鼠肾小管上皮细胞Smurf2的CDS区,构建克隆载体pEASY-Zero-Smurf2和真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,酶切并测序鉴定。运用脂质体转染法将pEGFP-N3-Smurf2真核表达载体转染小鼠肾小管上皮细胞,实时荧光定量PCR、免疫印迹检测Smurf2的表达。PCR结果显示扩增出Sm