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【中图分类号】R115 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）03-01717-02
卫生细菌检验中压力蒸汽灭菌效果检测的不确定问题正受到人们越来越多的重视，随着科学发展和检验技术进步对检验数据的准确性和可靠性提出了更高的要求，特别是检验数据质量高低需要得到规范、评价和承认[1]。压力蒸汽灭菌效果检测在《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》、《消毒技术规范》2002年版以及《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准中都有描述；要保证检测结果的准确性和可靠性，真实准确地反映所检样品中细菌污染的状况，在检测操作的每一過程都是关键的一环。本研究拟结合工作实践，对这三个标准中关于压力蒸汽灭菌效果检测中存在的若干问题提出我们的浅见，以供商榷。
1 名称
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》、《消毒技术规范》2002年版以及《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准，分别叫的名称是压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准、压力蒸汽灭菌效果的监测方法生物监测法以及压力蒸汽灭菌的生物监测方法。我们认为这一标准是判定压力蒸汽灭菌的效果，所采用的方法是生物监测方法，故我们建议在标准中应该改为压力蒸汽灭菌效果评价生物监测法。
2 监测步骤
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》的监测步骤描述的是“生物学指标（用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据）。将嗜热脂肪芽孢杆菌菌片分别放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。灭菌柜室内，上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包（由三件平纹长袖手术衣，4块小手术巾，2块中手术巾，1块大手术巾，30块10cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小）。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒（22cm×13cm×6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部[2]。” 《消毒技术规范》2002年版对于此的描述是“将两个嗜热脂肪芽孢杆菌菌片分别放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。再下排气压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包（由三件平纹长袖手术衣，4块小手术巾，2块中手术巾，1块大毛巾，30块10cm×10cm8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小）；预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准测试包（由16条全棉手术巾每条41cm×66cm，将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层然后叠放，作成23cm×23cm×15cm大小的测试包）；手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒（22cm×13cm×6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部[3]”；《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》是按照《消毒技术规范》的步骤实施的。《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》中描述的是灭菌柜室内没有细分是否包括下排气式或者是预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器，而我们认为应该按照《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》和《消毒技术规范》2002年版的中描述，这样在工作中才能对具体是哪一类型的压力蒸汽灭菌设备采用什么监测步骤来实施给予了很好的指导，不能在标准中有含糊的描述。
3 培养条件
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》对于培养条件的描述是“经过一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水中培养基中，56℃培养48小时，观察其颜色变化。[2]” 《消毒技术规范》2002年版以及《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准中的描述是“经过一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水中培养基中，56℃±1℃培养7d（自含式生物指示物按说明书执行），观察培养基颜色变化。检测时设阴性和阳性对照[3，4]”。上述三个标准中两个使用的是56℃培养7天，而另外一个标准的描述却是56℃培养48小时。嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）属嗜热性需氧芽孢杆菌，但兼有厌氧的特性，细菌繁殖体G兰氏染色阳性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。其最低生长温度为28℃，最高生长温度70～77℃。最适生长繁殖温度为56～65℃，培养24h即可形成菌落。故我们认为培养时间应该统一改为56℃培养48小时。
4 结果判定及评价
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》的判定为同次检测中，标准试验包或通气贮物盒内，每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基全部不变色，判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌不合格[2]。《消毒技术规范》2002年版的判定为每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色，判定为灭菌合格；指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌过程不合格[3]。《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准中的结果判定为阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致[4]。上述标准中描述的结果判定和评价也是不一样的，有的写的是以阴阳性对照为判定基础，有的是以溴甲酚紫蛋白胨水培养基的颜色是否发生变化为基础，我们认为应该统一，对于不合格的描述也不一样有的是灭菌过程不合格，有的是灭菌不合格。故我们认为应该统一描述成以溴甲酚紫蛋白胨水培养基的颜色是否发生变化为基础来判定灭菌合格或者是灭菌不合格。
参考文献：
[1] 沈红，细菌菌落总数检测中存在的若干问题之探讨[J] 疾病监测， 2006， 23（7）： 388
[2] 《消毒与灭菌效果评价方法与标准》（GB15982- 1995） [S]
[3] 卫生部《消毒技术规范》（2002） [S]
[4] 《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准》（WS 310.3-2009）[S]
卫生细菌检验中压力蒸汽灭菌效果检测的不确定问题正受到人们越来越多的重视，随着科学发展和检验技术进步对检验数据的准确性和可靠性提出了更高的要求，特别是检验数据质量高低需要得到规范、评价和承认[1]。压力蒸汽灭菌效果检测在《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》、《消毒技术规范》2002年版以及《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准中都有描述；要保证检测结果的准确性和可靠性，真实准确地反映所检样品中细菌污染的状况，在检测操作的每一過程都是关键的一环。本研究拟结合工作实践，对这三个标准中关于压力蒸汽灭菌效果检测中存在的若干问题提出我们的浅见，以供商榷。
1 名称
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》、《消毒技术规范》2002年版以及《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准，分别叫的名称是压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准、压力蒸汽灭菌效果的监测方法生物监测法以及压力蒸汽灭菌的生物监测方法。我们认为这一标准是判定压力蒸汽灭菌的效果，所采用的方法是生物监测方法，故我们建议在标准中应该改为压力蒸汽灭菌效果评价生物监测法。
2 监测步骤
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》的监测步骤描述的是“生物学指标（用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据）。将嗜热脂肪芽孢杆菌菌片分别放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。灭菌柜室内，上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包（由三件平纹长袖手术衣，4块小手术巾，2块中手术巾，1块大手术巾，30块10cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小）。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒（22cm×13cm×6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部[2]。” 《消毒技术规范》2002年版对于此的描述是“将两个嗜热脂肪芽孢杆菌菌片分别放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。再下排气压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包（由三件平纹长袖手术衣，4块小手术巾，2块中手术巾，1块大毛巾，30块10cm×10cm8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小）；预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准测试包（由16条全棉手术巾每条41cm×66cm，将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层然后叠放，作成23cm×23cm×15cm大小的测试包）；手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒（22cm×13cm×6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部[3]”；《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》是按照《消毒技术规范》的步骤实施的。《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》中描述的是灭菌柜室内没有细分是否包括下排气式或者是预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器，而我们认为应该按照《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》和《消毒技术规范》2002年版的中描述，这样在工作中才能对具体是哪一类型的压力蒸汽灭菌设备采用什么监测步骤来实施给予了很好的指导，不能在标准中有含糊的描述。
3 培养条件
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》对于培养条件的描述是“经过一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水中培养基中，56℃培养48小时，观察其颜色变化。[2]” 《消毒技术规范》2002年版以及《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准中的描述是“经过一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水中培养基中，56℃±1℃培养7d（自含式生物指示物按说明书执行），观察培养基颜色变化。检测时设阴性和阳性对照[3，4]”。上述三个标准中两个使用的是56℃培养7天，而另外一个标准的描述却是56℃培养48小时。嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）属嗜热性需氧芽孢杆菌，但兼有厌氧的特性，细菌繁殖体G兰氏染色阳性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。其最低生长温度为28℃，最高生长温度70～77℃。最适生长繁殖温度为56～65℃，培养24h即可形成菌落。故我们认为培养时间应该统一改为56℃培养48小时。
4 结果判定及评价
《消毒与灭菌效果评价方法与标准 GB 15981-1995》的判定为同次检测中，标准试验包或通气贮物盒内，每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基全部不变色，判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌不合格[2]。《消毒技术规范》2002年版的判定为每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色，判定为灭菌合格；指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌过程不合格[3]。《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准 WS 310.3-2009》附录A标准中的结果判定为阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致[4]。上述标准中描述的结果判定和评价也是不一样的，有的写的是以阴阳性对照为判定基础，有的是以溴甲酚紫蛋白胨水培养基的颜色是否发生变化为基础，我们认为应该统一，对于不合格的描述也不一样有的是灭菌过程不合格，有的是灭菌不合格。故我们认为应该统一描述成以溴甲酚紫蛋白胨水培养基的颜色是否发生变化为基础来判定灭菌合格或者是灭菌不合格。
参考文献：
[1] 沈红，细菌菌落总数检测中存在的若干问题之探讨[J] 疾病监测， 2006， 23（7）： 388
[2] 《消毒与灭菌效果评价方法与标准》（GB15982- 1995） [S]
[3] 卫生部《消毒技术规范》（2002） [S]
[4] 《医院消毒供应中心 清洗消毒及灭菌效果监测标准》（WS 310.3-2009）[S]