【摘 要】
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目的 探讨miR-26a和异黏蛋白(MTDH)的关系.方法 采用免疫组织化学SP染色法检测86例食管癌病理组织芯片中MTDH的表达,采用原位杂交检测miR-26a的表达,分析两者表达的相关性.通过生物信息学预测软件Targetscan Human7.2预测MTDH在miR-26a序列上的结合片段.采用荧光素酶报告实验验证MTDH与miR-26a的靶向调控关系.用慢病毒干扰和过表达的食管癌细胞系进行裸鼠皮下注射,观察瘤块的形成,采用免疫组织化学染色法和原位杂交法检测各组瘤体中MTDH和miR-26a的表达,
【机 构】
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无锡太湖学院护理学院基础医学教研室,江苏无锡214000;上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻喉科,上海200011
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目的 探讨miR-26a和异黏蛋白(MTDH)的关系.方法 采用免疫组织化学SP染色法检测86例食管癌病理组织芯片中MTDH的表达,采用原位杂交检测miR-26a的表达,分析两者表达的相关性.通过生物信息学预测软件Targetscan Human7.2预测MTDH在miR-26a序列上的结合片段.采用荧光素酶报告实验验证MTDH与miR-26a的靶向调控关系.用慢病毒干扰和过表达的食管癌细胞系进行裸鼠皮下注射,观察瘤块的形成,采用免疫组织化学染色法和原位杂交法检测各组瘤体中MTDH和miR-26a的表达,分析其关系.结果 MiR-26a在食管癌组织中的表达明显低于配对癌旁正常食管组织,而MTDH在食管癌组织中的表达明显高于配对癌旁正常食管组织.MiR-26a的表达与患者病理分级(P＜0.05)、N分期(P＜0.05)、肿瘤体积(P＜0.01)有关.MTDH在食管癌中的表达与N分期(P＜0.05)、分化程度(P＜0.01)有关.采用Targetscan Human7.2生物信息学软件预测发现,MTDH基因中含有1个hsa-miR-26a的靶序列.荧光素酶报告基因实验也证实了miR-26a与MTDH的靶向调控关系.MiR-26a在KYSE-450细胞中表达最高,在Eca109细胞中表达量最低,本研究采用KYSE-450细胞系进行miR-26a干扰实验的裸鼠实验,采用Eca109细胞系进行过表达实验.过表达miR-26a慢病毒转染的细胞注射裸鼠皮下,成瘤后miR-26a的表达升高,MTDH的表达降低.干扰miR-26a慢病毒转染的细胞注射裸鼠皮下,成瘤后瘤块中miR-26a的表达降低,MTDH表达升高.结论 MiR-26a能抑制食管癌细胞MTDH表达,在体外和体内实验,均可验证miR-26a与MTDH的靶向调控关系,miR-26a可能通过MTDH通路在食管癌的发生和发展中扮演着癌基因的角色.
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