探讨下调甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）基因表达对顺铂耐药的卵巢上皮性癌（卵巢癌）SKOV3/DDP细胞体内外生物学特性的影响。
方法（1）MTRR基因下调的SKOV3/DDP细胞系的构建及鉴定：设计4个针对MTRR基因不同靶序列的短发夹状RNA （shRNA ），分别为U6-GFP-Neo-homo-1106、U6-GFP-Neo-homo-1931、U6-GFP-Neo-homo-419、U6-GFP-Neo-homo-1460，蛋白印迹（western blot）法筛选干扰效果最好的针对MTRR基因的shRNA连接至pSicoR质粒，建立重组慢病毒干扰载体（即pSicoR-1106）并感染SKOV3/DDP细胞，流式细胞仪筛选稳定转染的细胞，逆转录（RT）-PCR技术及western blot法验证转染后细胞中MTRR mRNA和蛋白的表达。（2）体外实验：实验分为3组，重组慢病毒干扰载体pSicoR-1106、阴性对照质粒pSicoR-NC及包装质粒采用脂质体法分别转染肾上皮细胞系293T细胞，所得病毒上清液感染SKOV3/DDP细胞，所得感染后细胞即为下调MTRR基因的SKOV3/DDP-MTRRi细胞（SKOV3/DDP-MTRRi组）以及阴性对照SKOV3/DDP-NC细胞（SKOV3/DDP-NC组，作为阴性对照）和未转染的SKOV3/DDP细胞（SKOV3/DDP组，作为空白对照）。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定3组细胞的生长情况及其对顺铂的耐药性[以50％抑制浓度（IC50）表示]；不同浓度（0、1、2、4 μg/ml）的顺铂作用后，克隆形成实验检测3组细胞的克隆形成情况，流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期比例。（3）体内实验：将上述3组细胞接种于裸鼠的腹股沟皮下，建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。以2.5 mg/kg顺铂腹腔注射（每2天1次，共21次）后，观察3组（每组8只）裸鼠移植瘤的生长情况，采用免疫组化SP法检测3组裸鼠移植瘤组织中MTRR、细胞增殖相关核抗原（Ki-67）蛋白的表达。
结果（1）western blot法筛选的干扰效果最好的针对MTRR基因的shRNA为U6-GFP-Neo-homo-1106，以此建立重组慢病毒干扰载体pSicoR-1106，转染SKOV3/DDP细胞后，其MTRR mRNA和蛋白的表达明显减弱，证实下调MTRR基因表达的SKOV3/DDP细胞系构建成功。（2） MTT比色法检测显示，第5天开始，SKOV3/DDP-MTRRi组细胞的生长速度明显慢于SKOV3/DDP-NC组和SKOV3/DDP组（P<0.05）；SKOV3/DDP-MTRRi组、SKOV3/DDP-NC组、SKOV3/DDP组细胞对顺铂的IC50分别为4.01、7.90、8.91 μg/ml, SKOV3/DDP-MTRRi组明显低于SKOV3/DDP-NC组和SKOV3/DDP组（P<0.05 ）。不同浓度（0、1、2、4 μg/ml）的顺铂作用后，克隆形成实验检测显示，各浓度下SKOV3/DDP-MTRRi组克隆形成个数均明显少于SKOV3/DDP-NC组、SKOV3/DDP组（P<0.05）；流式细胞仪检测显示，当顺铂浓度为4 μg/ml时，SKOV3/DDP-MTRRi组细胞的G0/G1期比例为（72.8±5.0）%，明显高于SKOV3/DDP-NC组及SKOV3/DDP组［分别为（64.4±2.5）%、（64.3±3.0）%，P<0.05]。（3）裸鼠腹腔内注射顺铂6周后，SKOV3/DDP-MTRRi组、SKOV3/DDP-NC组、SKOV3/DDP组裸鼠移植瘤的体积分别为（97 ± 32）、（168 ± 45）、（173 ± 32）mm3，移植瘤质量分别为（0.36 ± 0.17）、（1.08 ± 0.17）、（1.11 ± 0.20）g，SKOV3/DDP-MTRRi组上述指标均明显低于SKOV3/DDP-NC组、SKOV3/DDP组（P<0.05）。3组移植瘤组织中，MTRR蛋白的阳性表达率分别为2/8、5/8、7/8 ，Ki-67蛋白的阳性表达率分别为1/8、6/8、7/8，SKOV3/DDP-MTRRi组上述指标均明显低于SKOV3/DDP-NC组、SKOV3/DDP组（P<0.05）。
结论MTRR基因表达下调后在体内外均能降低顺铂耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞的增殖能力，并增加其对顺铂的敏感性。