采用微阵列数字PCR检测JAK2基因V617F突变

• 作 者: 许笑 张群峰 张心菊 唐宜桂 任惠民 杨瑞 樊妮 陈波斌 关明
• 机 构: 200040 上海，复旦大学附属华山医院中心实验室,上海市第五人民医院检验科,200040 上海，复旦大学附属华山医院中心实验室,复旦大学附属华山医院检验科,200040 上海，复旦大学附属华山医院中
• 出 处: 中华检验医学杂志
• 发表日期: 2016年39期
• 关键词: 聚合酶链反应 微芯片分析技术 DNA突变分析 骨髓肿瘤

目的

采用数字PCR检测骨髓增殖性肿瘤相关的JAK2基因V617F突变，评估该法的灵敏度、重复性和准确性。

方法

方法学评价。自2014－2015年间复旦大学附属华山医院收治的患者中，选取已知JAK2基因V617F突变的18例真性红细胞增多症病例、11例原发性血小板增多症病例、2例特发性骨髓纤维化病例及未知突变的6例红细胞异常增高病例和10名健康对照者。分别以HEL细胞株DNA和SW480细胞株DNA为突变型对照和野生型对照，稀释突变标准品为30%、10%、1%、0.1%和0.01%以验证微阵列数字PCR体系的灵敏度。使用两例低突变负荷样本(1%和10%)，各重复5次，验证数字PCR体系重复性。以MGB探针法荧光定量PCR作为对照参考方法，检测微阵列数字PCR的检测性能。

结果

实验结果表明两种检测方法相关性高(R²＝0.998 3)，而微阵列数字PCR能够检测最低约0.1%的微量突变，相应的突变拷贝数绝对定量为0.16拷贝/μl。突变负荷为1%和10%的样本重复性检测结果CV分别为17.29%和7.50%。此外，MGB探针法和数字PCR法均成功地从31例已知突变的病例样本中均检出JAK2基因V617F突变阳性，而10名健康对照者都为阴性，两种方法得到的结果是一致的。从6例红细胞异常增高的病例中，MGB法未检出突变，而数字PCR成功检出2例微量突变样本，其突变率分别为0.37%和0.18%。

结论

微阵列数字PCR在JAK2基因V617F突变检测体系中表现出比荧光定量PCR的更高的灵敏度以及良好的稳定性，有助于其在体细胞突变微量情况下更准确地检出突变，避免漏诊误诊。(中华检验医学杂志，2016, 39：176-180)