HSPb1真核表达载体的构建及其在乳腺癌细胞中表达的研究

• 作 者: 时鹏 王明明 孙靖中 冯进波
• 机 构: 山东省立医院普外科,山东大学齐鲁医院乳腺外科,山东大学齐鲁医院心血管病中心实验室
• 出 处: 中国现代普通外科进展
• 发表日期: 2007年6期
• 关键词: 乳腺肿瘤 热休克蛋白质类 基因表达 基因重组 克隆 分子 Breast neoplasms Heat-shock protain-Gene expression

目的：构建重组人HSPb1真核表达载体质粒，为研究HSPb1与乳腺癌发生和化疗耐药的关系做准备。方法：从人乳腺癌细胞MCF-7中提取总RNA，RT-PCR法反转录合成cDNA。设计引物调取目的基因片段，与T载体连接后转化大肠埃希菌DH-5α，筛选菌落并抽提质粒。测序正确后双酶切克隆进入真核表达载体pcDNA3．1中，得到重组质粒pcDNA3．1-HSPbl。用pcDNA3．1-HSPb1转染人乳腺癌细胞MDA-MA-231，RT-PCR法和Westernblot法鉴定重组质粒在其中的表达。结果：经酶切证实