蛋白激酶C结合蛋白1参与心力衰竭小鼠心脏去甲肾上腺素转运蛋白的表达下调

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目的

观察去甲肾上腺素转运蛋白(NET)和蛋白激酶C结合蛋白1(PICK1)的相互作用,并检测慢性心力衰竭小鼠心脏NET和PICK1 mRNA和蛋白的表达变化。

方法

(1)细胞实验:293T细胞分为4组,分别转染质粒NET(NET组)、GFP–PICK1(GFP–PICK1组)、NET+GFP–PICK1(NET+GFP–PICK1组)以及NET+GFP–PICK1(KD–AA)[NET+GFP–PICK1(KD–AA)组],48 h后行免疫荧光化学染色进行亚细胞定位检测。(2)动物实验:雄性C57BL/6J小鼠分为阿霉素组和正常对照组(对照组),每组各20只小鼠,分别于腹腔注射阿霉素(2 mg·kg-1·次-1,累计用量22 mg/kg)和生理盐水。实验第10周末采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测心脏NET、PICK1和肾上腺素能受体(β1–AR)的mRNA和蛋白表达水平。

结果

(1)PICK1与NET结合并介导NET的亚细胞定位。(2)阿霉素组和对照组小鼠颈交感神经节中NET mRNA的表达量分别为0.59±0.15和0.64±0.18,差异无统计学意义(P>0.05)。但阿霉素组PICK1 mRNA表达量明显低于对照组(0.73±0.13比1.18±0.15,P<0.05),且β1–AR的mRNA表达量亦显著低于对照组(0.62±0.12比1.00±0.11,P<0.05)。(3)阿霉素组小鼠心脏NET蛋白表达量明显低于对照组(0.72±0.04比0.75±0.03,P<0.05),而酪氨酸羟化酶蛋白表达量则显著高于对照组(0.95±0.06比0.84±0.07,P<0.01)。(4)阿霉素组和对照组小鼠的心脏交感神经纤维密度无明显差异。

结论

慢性心力衰竭小鼠心脏NET、PICK1的mRNA和蛋白表达均下调,PICK1介导的NET亚细胞定位障碍可能是心力衰竭时NET功能障碍的机制之一。

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