【摘 要】
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目的 构建人NANOGP8基因原核表达载体,并纯化其融合蛋白.方法 从plvx-NANOGP8重组质粒中扩增出NANOGP8基因,插入pGEX-4T-1载体中构建pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体,并转化大肠杆
【机 构】
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221002 江苏省,徐州医学院附属医院血液病科
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目的 构建人NANOGP8基因原核表达载体,并纯化其融合蛋白.方法 从plvx-NANOGP8重组质粒中扩增出NANOGP8基因,插入pGEX-4T-1载体中构建pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体,并转化大肠杆菌BL21,优化其表达条件,分别以可溶及包涵体形式得到了融合蛋白并进行纯化,采用Western blot检测其抗原性.结果 成功构建了重组表达载体pGEX-4T-1-NANOGP8,经37℃诱导6h获得主要以包涵体形式存在的融合蛋白;而经16℃过夜诱导可获得可溶性融合蛋白,并分别成功对两种形式融合蛋白进行纯化且经Western blot检测显示其抗原性良好.结论 成功获得NANOGP8纯化蛋白,可用于进一步研究NANOGP8基因在肿瘤中的作用.
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