自体脂肪源性间充质干细胞局部移植对兔耳增生性瘢痕形成的影响

• 作 者: 陈璐 王达利 魏在荣 王波 祁建平 孙广峰
• 机 构: 563003 贵州遵义医学院附属医院烧伤整形外科（现在贵州电力职工医院外科，550002）,563003 贵州遵义医学院附属医院烧伤整形外科,563003 贵州遵义医学院附属医院烧伤整形外科,5630
• 出 处: 中华烧伤杂志
• 发表日期: 2016年32期
• 关键词: 伤口愈合 瘢痕 间质干细胞移植 脂肪源性间充质干细胞

目的

探讨兔自体脂肪源性间充质干细胞(ADSC)局部移植对兔耳增生性瘢痕形成的影响。

方法

取6只新西兰大耳白兔腹股沟处脂肪组织，分离ADSC并进行传代培养。取每只兔的第3代ADSC进行以下实验。在每只兔每侧耳腹造成6个直径为6 mm的全层皮肤缺损创面，观察创面上皮化情况及局部组织增生情况，记录创面完全上皮化时间和增生性瘢痕形成时间。选择兔左耳创面为ADSC组，右耳创面为对照组，每组36个创面。于创面完全上皮化后(伤后25 d)，ADSC组创面注射0.2 mL溴脱氧尿苷(BrdU)标记的自体ADSC悬液(浓度为5×10⁶个/mL)，对照组创面注射等量PBS。每5天注射1次，共注射3次(后2次注射于创面愈合后形成的瘢痕内)。于第3次注射后5 d分别切取2组增生性瘢痕组织，HE染色观察组织形态，VG染色观察增生性瘢痕中胶原排列情况，荧光显微镜下观察增生性瘢痕中BrdU标记的ADSC分布，ELISA法检测增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β₁、核心蛋白多糖的蛋白含量，实时荧光定量RT-PCR法检测增生性瘢痕中TGF-β₁、核心蛋白多糖的mRNA表达。对数据行配对t检验。

结果

(1)兔耳创面完全上皮化时间为伤后(20.0±2.0)d，伤后(35.0±2.2)d增生性瘢痕形成。伤后40 d，对照组增生性瘢痕仍维持较明显的增生状态，ADSC组增生性瘢痕体积缩小、变平、质地变软、色泽稍变浅。(2)与对照组比较，ADSC组增生性瘢痕中上皮细胞层数增多，可见上皮脚样及真皮乳突样结构形成，真皮层有核细胞数量明显增多。对照组增生性瘢痕中胶原紧密，排列较紊乱；ADSC组增生性瘢痕中胶原密度较对照组下降，排列较规整。(3)伤后40 d，ADSC组增生性瘢痕中仍可见BrdU标记的ADSC。(4)ADSC组增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β₁、核心蛋白多糖蛋白含量分别为(1.40±0.04)、(8.18±0.23)μg/L及(25.1±0.7)ng/L、(4.872±0.101)ng/mL，对照组增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β₁、核心蛋白多糖蛋白含量分别为(2.29±0.05)、(12.20±0.38)μg/L及(37.2±1.1)ng/L、(4.143±0.024)ng/mL。与对照组比较，ADSC组增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β₁蛋白含量明显降低(t值为-33.66～-22.84，P值均小于0.001)，核心蛋白多糖蛋白含量明显增高(t＝10.41，P<0.001)。(5)与对照组比较，ADSC组增生性瘢痕中TGF-β₁ mRNA表达量明显降低(t＝4.45，P<0.01)，核心蛋白多糖的mRNA表达量明显升高(t＝5.61，P<0.01)。

结论

兔增生性瘢痕形成早期瘢痕内移植自体ADSC可抑制增生性瘢痕的形成，改善创面愈合质量，其机制可能与ADSC下调TGF-β₁及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达，上调核心蛋白多糖的表达有关。