【摘 要】
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目的:构建带GST标签的人源沉默信息调节因子6(SIRT6)基因原核表达载体并表达纯化GST-SIRT6重组蛋白。方法:以人乳腺文库为模板,经PCR扩增,酶切后插入带GST标签的pGEX-KG载体,
【机 构】
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贵州大学医学院; 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所; 山西医科大学第二医院; 大连医科大学肿瘤干细胞研究院; 中部战区总医院卫勤部科训科;
【基金项目】
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国家自然科学基金（81902838,81372596,81802756）
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目的:构建带GST标签的人源沉默信息调节因子6(SIRT6)基因原核表达载体并表达纯化GST-SIRT6重组蛋白。方法:以人乳腺文库为模板,经PCR扩增,酶切后插入带GST标签的pGEX-KG载体,连接成GST-SIRT6重组质粒进行测序;GST-SIRT6重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态,并加入IPTG进行小量诱导,通过Western印迹检测GST-SIRT6蛋白表达;将能成功诱导GST-SIRT6表达的菌液大量扩增,IPTG诱导后利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化GST-SIRT6蛋白,并用考马斯亮蓝染色检测;运用GST Pulldown实验验证SIRT6和缺氧诱导因子HIF1α的相互作用。结果:从乳腺文库中,PCR扩增出约1059 bp的SIRT6基因;诱导GST-SIRT6重组蛋白表达并纯化获得纯度较好的重组蛋白;GST-Pulldown实验检测出有相互作用条带。结论:构建了GST-SIRT6原核表达载体,验证了GSTSIRT6与HIF1α的相互作用,为进一步研究SIRT6在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。
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