【摘 要】
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目的 观察自噬在小鼠皮肤创面愈合中的发生情况,探讨其在创面修复中的可能作用。方法 以GFP-LC3转基因小鼠制备皮肤后背部创面,在致伤后0、3、7、14d取皮肤创面组织制作石蜡
【机 构】
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陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医学工程研究中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(81372061,81673089);重庆市基础与前沿研究计划项目(CSTC2016jcyjA0381)~~
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目的 观察自噬在小鼠皮肤创面愈合中的发生情况,探讨其在创面修复中的可能作用。方法 以GFP-LC3转基因小鼠制备皮肤后背部创面,在致伤后0、3、7、14d取皮肤创面组织制作石蜡切片进行GFP免疫荧光染色标记自噬点,观察自噬在创面愈合过程中的动态变化;采用GFP抗体与α-SMA、F4/80抗体进行荧光双标,明确肉芽间质中发生自噬的主要细胞类型。而后将GFP-LC3小鼠分为自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理组与对照组等两组,伤后连续10 d腹腔注射3-MA(10 mg/kg),动态观察创面大体愈合情况,在0、7、10 d取创面皮肤,组织学固定染色,评价自噬对创面愈合的影响;同时采用定量PCR(q RT-PCR)检测α-SMA、TGF-β1、PAI-1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原等分子的m RNA表达,评价自噬对创面修复过程中胶原与胞外基质表达水平的影响。结果 创面愈合过程中自噬水平先增强后逐渐回落,在增殖期(7 d)的自噬水平最高;肉芽角质细胞自噬强于间质细胞,肉芽间质中发生自噬的细胞主要为α-SMA阳性肌成纤维细胞;与对照组相比,3-MA处理组在伤后7 d与10 d的创面肉芽的面积、宽度与表皮厚度差异均无统计学意义(P>0.05),而处理组7 d表皮基底细胞增殖活力增强(P<0.05);两组的α-SMA、胶原、TGF-β1与PAI-1等分子m RNA水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 皮肤创面愈合过程中增殖期存在高自噬水平,但抑制小鼠创面愈合过程中的自噬水平对创面愈合未见显著影响。
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