GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位

• 作 者: 伍贤军 缪璇 程秀 王妍青 辻一郎 李晓萌
• 机 构: 东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所,日本东北大学医学部公共卫生学院
• 出 处: 吉林大学学报：医学版
• 发表日期: 2011年6期
• 关键词: GFP-SUMO-3融合蛋白 重组蛋白质类 LNCAP细胞 基因表达
• 基金项目: 国家自然科学基金资助课题(30871301,30700827), 科技部国际合作项目资助课题(2010DFA31430), 国家高校基本科研业务费专项基金资助课题(09SSXT035,10SSXT147,10JCXK004), 吉林省科技厅科研基金资助课题(20080731,200905116), 国家大学生创新性实验计划项目资助课题(101020031)

目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3通过酶切和测序鉴定正确后,脂质体法将重组质粒转染至LNCaP中,利用GFP抗体通过Western blotting检测GFP-SUMO-3融合蛋白的表达,通过荧光显微镜观察其在细胞中的表达及分布。结果:重组质