Smad4-siRNA真核表达载体的构建与鉴定

• 作 者: 李萍 范玉强 曹武奎 梁树人 李顺天 郄春花 戴晨阳 李秀梅
• 机 构: 天津市传染病医院天津市肝病研究所
• 出 处: 实用预防医学
• 发表日期: 2007年4期
• 关键词: SMAD4 RNA干扰 肝纤维化 载体构建 Smad4 RNA interference Hepatic fibrosis Vector construc

目的构建Smad4特异的RNA干扰质粒载体，为探讨抑制Smad4表达在肝纤维化治疗中的意义奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的Smad4基因核苷酸序列，选择设计能转录小发夹结构RNA（Small hairpin RNAs，shRNA）的DNA序列，并与psilencer3.1-H1-hygro质粒载体连接，构建真核表达载体，使用限制性内切酶鉴定及测序鉴定是否为阳性克隆。结果成功构建psilencer3．1-Smad4载体，拟进一步采用RNAi技术观察其对Smad4基因表达的抑制情况，从而研究其在肝