【摘 要】
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目的研究融合自杀基因CDglyTK治疗喉癌.方法PCR扩增、酶切、连接、转化等构建质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CDglyTK,Xho Ⅰ/HindⅢ酶切鉴定,测序分析CDglyTK基因序列.建立稳定
【机 构】
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中南大学湘雅医院,中南大学现代分析测试中心
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目的研究融合自杀基因CDglyTK治疗喉癌.方法PCR扩增、酶切、连接、转化等构建质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CDglyTK,Xho Ⅰ/HindⅢ酶切鉴定,测序分析CDglyTK基因序列.建立稳定表达CDglyTK基因的Hep-2细胞株,RT-PCR及Western-blotting鉴定CDglyTK基因的表达.MTT法观察5-FC、GCV、5-FC+GCV对表达CDglyTK基因的Hep-2细胞生长的抑制作用.结果酶切和基因测序分析证明重组质粒含完整的CD及TK基因,RT-PCR从转染细胞总RNA中扩出707 bp的预期片段,Western-blotting检测到该基因表达的59kDa的蛋白.表达CDglyTK基因的Hep-2细胞在5-FC、GCV、5-FC+GCV干预下生长受到抑制,5-FC与GCV联合有更强的杀伤效应.结论CDglyTK融合自杀基因可以成为基因治疗喉癌的有效方法.
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