【摘 要】
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双突变的胰岛素原基因在E.coli温度诱导表达体系中直接高密度发酵表达,表达产物形成的包含体经变复性处理及Sephadex G50纯化后,再由胰酶及羧肽酶B联合酶切,FPLC Mono Q纯化,
【机 构】
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中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室,中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室,中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室,中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室,
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双突变的胰岛素原基因在E.coli温度诱导表达体系中直接高密度发酵表达,表达产物形成的包含体经变复性处理及Sephadex G50纯化后,再由胰酶及羧肽酶B联合酶切,FPLC Mono Q纯化,最终得到B链羧端去三肽胰岛素(B28-B30)(DTRI)和去四肽(B27-B30)(DTI)胰岛素的纯品.应用悬滴气相扩散法在含丙酮的柠檬酸钠缓冲体系中培养出可供X射线衍射用DTRI单晶.空间群为P2_12_12_1,晶胞参数为a=4.98nm,b=5.21nm,c=8.92nm.晶体学不对称单位中含有4～6个DTRI分子.我们在考察胰岛素二体结构模型并比较一些胰岛素衍生物结构及缔合行为的基础上,探讨了胰岛素二体形成的可能机制,并对其意义作了初步的讨论.
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