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详细研究了酶系统、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间、pH值、菌龄等因素对白灵菇（Pleurotus nebrodensis）原生质体制备与再生的影响。通过单因素和正交实验确定最适条件为：采用7日龄菌丝，以0．6M甘露醇作为渗透压稳定剂，pH5．8时，在1．5％溶壁酶＋0．2％蜗牛酶＋0．3％纤维素酶的作用下，32℃水浴酶解2．5～3h，可得到1．7×10^7／mL原生质体。再用双层混合再生培养基培养。可达到1．3％再生率。