血管内皮生长因子原核表达载体的构建及表达

• 作 者: 庞丽君 刘道洁 林明华 刘凯 刘晓霓 陈德喜
• 机 构: 首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所,北京市海淀区妇幼保健院检验科
• 出 处: 中国医药导报
• 发表日期: 2020年23期
• 关键词: 血管内皮生长因子 肝细胞癌 基因克隆 原核表达 Vascular endothelial growth factorHepatocellular carcino
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目(81972788),北京市自然科学基金资助北京市教育委员会科技计划重点项目(KZ202010025037)

目的构建血管内皮生长因子(VEGF)原核表达载体并诱导其表达蛋白,为后续进行VEGF相关研究奠定基础。方法通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到目的片段,将DNA片段克隆至带组氨酸标签的pET-30a(+)载体上;构建的重组质粒经过菌液聚合酶链式反应(PCR)及测序方法鉴定;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒表达,通过蛋白质印迹法(Western blot)进行鉴定。结果以HepG2细胞为模板扩增出大小正确的片段;构建的pET-30a-VEGF重组质粒经菌液PCR及DNA测