【摘 要】
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目的 制备重组小纤溶酶,并检测其生物学活性.方法 将重组质粒pETlla-miniPlg转化E.coli BL21(DE3),进行诱导表达.收获菌体,提取包涵体,经复性、层析纯化、尿激酶激活,制备小
【机 构】
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上海富纯中南生物技术有限公司,上海,201203
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目的 制备重组小纤溶酶,并检测其生物学活性.方法 将重组质粒pETlla-miniPlg转化E.coli BL21(DE3),进行诱导表达.收获菌体,提取包涵体,经复性、层析纯化、尿激酶激活,制备小纤溶酶.进行初步理化鉴定后,采用生色底物法测定其体外活性,采用动物模型进行体内溶栓试验,并与重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)进行比较.结果 小纤溶酶的表达量约占菌体总蛋白的30%～35%,纯化收率约为15%,得率为4.93 mg/g菌体湿重,相对分子质量为38 527,N-、C-端氨基酸序列与理论值一致.制备的小纤溶酶比活性为115 IU/mg,动物模型溶栓试验中表现出良好的溶栓效果,对纤溶系统和凝血系统影响轻微.结论 所制备的重组小纤溶酶具有良好的生物学活性,溶栓效果及安全性均优于rt-PA.
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