【摘 要】
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目的 研究不同数量多房棘球蚴原头节感染小鼠脾巨噬细胞亚群及其极化表型的变化.方法 60只C57BL/6小鼠随机分为低、中、高感染组和对照组,每组15只.低、中、高感染组每只小鼠分别经肝门静脉穿刺接种50、500和2000个多房棘球蚴原头节,对照组注射等量的生理盐水.感染后2、12和24周,各组随机选5只小鼠摘取脾脏,称量后计算脾脏系数:分离脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组小鼠脾巨噬细胞不同亚群比例和数量:提取小鼠脾淋巴细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1和M2极化相关基因的mRNA相对转录水
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院,临床医学研究院,省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆包虫病基础医学重点实验室,乌鲁木齐830054;新疆医科大学基础医学院,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一
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目的 研究不同数量多房棘球蚴原头节感染小鼠脾巨噬细胞亚群及其极化表型的变化.方法 60只C57BL/6小鼠随机分为低、中、高感染组和对照组,每组15只.低、中、高感染组每只小鼠分别经肝门静脉穿刺接种50、500和2000个多房棘球蚴原头节,对照组注射等量的生理盐水.感染后2、12和24周,各组随机选5只小鼠摘取脾脏,称量后计算脾脏系数:分离脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组小鼠脾巨噬细胞不同亚群比例和数量:提取小鼠脾淋巴细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1和M2极化相关基因的mRNA相对转录水平,其中M1型极化相关基因为白细胞介素-1β(IL-1β)、γ干扰素(IFN-γ)、趋化因子(C-X-C基序)配体11 (CXCL11)、趋化因子(C-C基序)受体7(CCR7)和CD86,M2型极化相关基因为甘露糖受体C-1型(MRC1)、抵抗素样分子α(Retnla)和精氨酸酶1(ARG1),以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参.采用SPSS 26.0软件进行统计学分析,不同时间点多组间的比较采用单因素方差分析,同一感染时间点的两两比较采用LSD法检验.结果 感染后2周,高感染组小鼠脾脏质量、脾脏系数、脾淋巴细胞数量、脾巨噬细胞比例、脾巨噬细胞数量和Ly-6C高表达(Ly-6Chigh)巨噬细胞的比例分别为(157.2+22.8)mg、 (0.8±0.1)％、 (10.3±2.9)×107、 (9.2±6.4)％、 (48.9±32.7)×105和(75.8±4.6)％,均高于对照组[(75.0±18.3) mg、 (0.4±0.1)％、(3.1±1.3)×107、 (4.3±0.7)％、 (7.7±4.1)×105、 (52.1±8.4)％]、低感染组[(89.2±7.4)mg、(0.4±0.0)％、 (5.4±2.3)×107、 (3.0±0.9)％、 (9.3±6.9)×105、 (50.1±8.8)％]和中感染组[(102.6±15.2) mg、 (0.5±0.1)％、 (7.0±2.1)×107、(3.5±0.3)％、 (13.7±3.9)×105、 (60.3±8.7)％](F=22.744、23.542、9.318、3.935、6.617、11.197,P＜0.05或P＜0.01);Ly-6C低表达(Ly-6Clow)巨噬细胞比例(20.3±4.2)％低于对照组(39.0±7.1)％、低感染组(41.2±8.6)％和中感染组(34.2±7.1)％(F=9.157,P＜ 0.01).感染后12周,高感染组小鼠脾脏质量、脾脏系数、脾巨噬细胞比例、巨噬细胞数量以及Ly-6Chigh巨噬细胞比例均高于对照组、低感染组和中感染组(F=12.730、14.173、20.380、7.943和25.838,P＜0.01);Ly-6Clow巨噬细胞比例低于对照组、低感染组和中感染组(F=27.668,P＜0.01).感染后24周,高感染组小鼠脾脏质量、脾脏系数、脾淋巴细胞数量、脾巨噬细胞比例和数量均高于对照组、低感染组和中感染组(F=8.664、7.318、13.047、3.315、6.007,P＜ 0.05或P＜0.01);Ly-6Chigh和Ly-6Clow巨噬细胞比例与对照组、低感染组和中感染组差异无统计学意义(F=3.177、2.709,P＞ 0.05),且随着感染时间的延长,Ly-6Chigh巨噬细胞比例逐渐降低(F=30.649,P＜ 0.01),Ly-6Clow巨噬细胞比例逐渐升高(F=32.407,P＜0.01).实时荧光定量PCR检测结果显示,感染后24周,高感染组M1型极化基因CXCL11的mRNA相对转录水平(28.2±36.3)高于对照组(1.9±2.7) (t=2.243,P＜ 0.05),CD86 (0.2±0.1)低于对照组(0.5±0.3) (t=-2.255,P＜ 0.05);M2型极化基因MRC1、Retnla和ARG1的mRNA相对转录水平(5.2±2.9、201.8±176.4、51.2±69.6)均高于对照组(1.8±1.5、0.8±0.8、1.2±0.8) (t=2.313、3.470、2.185,P＜ 0.05).结论 感染后2周,多房棘球蚴原头节高感染组小鼠脾脏募集大量Ly-6C阳性单核来源的巨噬细胞,感染进程中Ly-6Chigh巨噬细胞逐渐向Ly-6Clow转变,且在感染后12周和24周脾巨噬细胞以M2型为主,诱导小鼠免疫耐受,利于多房棘球蚴的慢性寄生.
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