重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞

• 作 者: 张平 赵钢勇 陈凯 宋月平 康增军 苏立凯
• 机 构: 河北大学附属医院神经内科,河北大学生物工程技术研究中心,河北工程大学农学院
• 出 处: 医学研究与教育
• 发表日期: 2012年1期
• 关键词: 脑源性神经生长因子 间充质干细胞 质粒 转染 brainderived neurotrophic factor mesenchymal stem cells
• 基金项目: 河北省科学技术研究与发展计划项目（08206120D）

目的探讨重组质粒plRESneo-EGFP-BDNF构建及转染至骨髓问充质干细胞（MSCs）制备BDNF基因工程细胞的方法。方法将pEGFP（N1）-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结，构建携带BDNF的高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF，采用电转染技术转染骨髓MSCs，经G418筛选，通过倒置荧光显微镜判断转染效率，采用Westernblot方式判定转染细胞是否表达BDNF蛋白。结果经过双酶切鉴定，pIRESneo-EGFP-BDNF携带EGFP及BDNF基因，以EGFP为报告基因