酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅰ基因的超表达

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利用重叠延伸PCR融合磷酸甘油激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)启动子和酿酒酵母乙醇脱氢酶基因Ⅰ(alcohol dehydrogenaseⅠ,adh1),将该融合片段插入带有G418抗性基因(KanMX)和loxP位点的pUG6质粒中,并在adh1基因下游插入细胞色素c(Cytochrome c transcription,CYC1)终止子,构建了酿酒酵母整合表达载体pUPGKAT。TthⅢⅠ内切酶线性化后转化酿酒酵母乙醇脱氢酶基因Ⅱ(adh2)敲除菌株YS2-△adh2。根据酿酒酵母同源重组机制,使adh1基因增加1个拷贝,且其中1个拷贝置于PGK强启动子下游,利用PGK启动子的调控成功实现adh1基因的超表达。厌氧发酵试验表明该重组菌株YS2-△adh2-adh1的乙醇产量较出发菌株提高了8.84%。
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