【摘 要】
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目的:构建含有TβRⅡ DNglytk的慢病毒质粒载体plenti6/V5-D-TOPO-TβRⅡ DNglytk,用含有TβRⅡ DNglytk质粒的慢病毒感染T淋巴细胞使其对转化生长因子-β(TGF-β)失敏感,恢
【机 构】
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天津市泌尿外科研究所,天津医科大学第二医院泌尿外科
【基金项目】
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天津市科技计划资助项目(项目编号:07ZCGYSF01000)
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目的:构建含有TβRⅡ DNglytk的慢病毒质粒载体plenti6/V5-D-TOPO-TβRⅡ DNglytk,用含有TβRⅡ DNglytk质粒的慢病毒感染T淋巴细胞使其对转化生长因子-β(TGF-β)失敏感,恢复其对肿瘤的杀伤活性。方法:以原始质粒为模板,PCR扩增TβRⅡ DN和HSV-tk基因,运用重组PCR方法将2个基因连接起来,获得TβRⅡDNglytk融合基因,再以此基因为模板,PCR扩增获得其对照基因TRANSglytk。应用Invitrogen公司提供的系统,通过TOPO技术将2个融合基因分别连接到慢病毒表达质粒,并经过测序验证。结果:完成慢病毒表达质粒载体TβRⅡ DNglytk的构建,经测序验证序列正确,可以用于相应慢病毒的生产。结论:运用重组PCR技术和TOPO技术成功构建了plenti6/V5-D-TOPO-TβRⅡ DNglytk载体,为产生对TGF-β不敏感的人肿瘤特异性淋巴细胞,并用于肿瘤的免疫治疗提供了基础。
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