【摘 要】
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目的 探讨miR-140对结肠癌RKO细胞迁移和侵袭能力的影响及其调控机制.方法 将miR-140模拟物、miR-140特异性抑制物和Smad3小干扰RNA(siRNA)等分别通过脂质体转染至细胞,应用
【机 构】
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116044,大连医科大学病理学与法医学教研室116044,大连医科大学口腔医学院;116044,大连医科大学解剖学教研室;
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目的 探讨miR-140对结肠癌RKO细胞迁移和侵袭能力的影响及其调控机制.方法 将miR-140模拟物、miR-140特异性抑制物和Smad3小干扰RNA(siRNA)等分别通过脂质体转染至细胞,应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞中miR-140和Smad3 mRNA的表达,应用Western blot检测Smad3蛋白的表达.采用细胞划痕实验和Transwell小室模型检测miR-140上调、miR-140下调和Smad3下调对RKO细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 Western blot结果显示,上调miR-140后,miR-140组中Smad3蛋白的相对表达水平为0.04±0.01,低于空白对照组(0.47±0.02)和阴性对照组(0.52 ±0.06,均P＜0.05).real-time PCR检测结果显示,miR-140组中Smad3 mRNA表达水平为1.11 ±0.13,与阴性对照组(1.00±0.06)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).细胞划痕实验显示,miR-140转染细胞的迁移能力均低于空白对照组和阴性对照组,而与Smad3 siRNA组比较,迁移能力无明显改变.Transwell小室迁移实验显示,miR-140组的穿膜细胞数为76.2±4.4,低于空白对照组(267.1±4.9)和阴性对照组(336.1±5.7,均P＜0.05),而与Smad3 siRNA组(83.5±7.3)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Transwell小室侵袭实验显示,miR-140组的穿膜细胞数为109.5±7.4,低于空白对照组(403.1±5.1)和阴性对照组(392.6±8.4,均P＜0.05);而与Smad3 siRNA组(138.8±3.6)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).miR-140下调可使Smad3蛋白表达增高,部分逆转miR-140对细胞迁移和侵袭能力的抑制作用.miR-140抑制剂和Smad3 siRNA共转染则对Smad3蛋白表达和细胞的迁移和侵袭能力无明显影响.结论 miR-140在转录后水平调控Smad3的表达.miR-140抑制结肠癌细胞迁移和侵袭能力,可能是通过下调Smad3来实现.miR-140可能作为肿瘤转移诊断及治疗的潜在候选靶点.
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