【摘 要】
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目的 探索药用植物阿里红多糖(fomes officinalis polysaccharides,FOPS)粗提物对刚地弓形虫(toxoplasma gondii,Tg) RH株速殖子体外感染小鼠腹腔巨噬细胞及虫体增殖和凋亡的
【机 构】
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新疆医科大学基础医学院,乌鲁木齐830011;新疆医科大学第一临床医学院;新疆医科大学药学院
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目的 探索药用植物阿里红多糖(fomes officinalis polysaccharides,FOPS)粗提物对刚地弓形虫(toxoplasma gondii,Tg) RH株速殖子体外感染小鼠腹腔巨噬细胞及虫体增殖和凋亡的影响.方法 CCK-8法计算FOPS粗提物对小鼠腹腔巨噬细胞的IC50并筛选安全药物剂量;建立刚地弓形虫RH株速殖子与小鼠腹腔巨噬细胞接种比例为1∶5的体外感染模型,分设空白对照组、强感染对照组和高(400 μg/ml)、中(200 μg/ml)、低(100 μg/ml)剂量组.Hochest 33258荧光染色观察虫体感染小鼠腹腔巨噬细胞6h、12 h、24 h、36 h、48 h形态及感染率变化;相对定量PCR法检测各实验组弓形虫529基因表达水平并计算虫体相对增殖抑制率;Annexin V-FITC结合流式细胞术检测感染10 h时高剂量(400 μg/ml)FOPS对培养上清中游离弓形虫凋亡的影响.结果 FOPS粗提物对小鼠腹腔巨噬细胞的IC50为1 038 μg/ml,安全药物剂量为519 μg/ml以下.Hochest 33258荧光染色发现高剂量组感染6h时细胞爬片中TgRH株速殖子无法侵入巨噬细胞且出现核固缩强亮荧光凋亡现象,12h内感染率仅(5.38±3.08)％,显著低于感染对照组.各药物组巨噬细胞感染率在各时间均低于感染对照组.48 h时中、高剂量组巨噬细胞感染率分别为(85.31±2.33)％和(67.58±3.47)％,低于感染对照组的(92.51±2.88)％,差异有统计学意义(F=150.4,P＜0.05);低剂量组巨噬细胞感染率为(91.96±2.31)％,与感染对照组相比差异无统计学意义(F =0.46,P＞0.05).弓形虫529基因表达水平显示感染48 h时高、中、低剂量FOPS的相对增殖抑制率分别为(75.70±0.03)％、(45.65±0.08)％和(38.98±0.06)％.流式细胞术检测高剂量H-FOP药物组感染10h时细胞上清中TgRH株速殖子细胞周期发现G1期前典型亚二倍凋亡峰,占弓形虫总数的20.44％.结论 FOPS可抑制刚地弓形虫TgRH株速殖子体外对小鼠腹腔巨噬细胞的感染和细胞内增殖,并在感染初期有抑制虫体入侵巨噬细胞、诱导虫体凋亡的作用.
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