米非司酮调控的单链鼠白介素12真核表达载体的构建及鉴定

• 作 者: 陈坚 薛绪潮 方国恩 苏长青 钱其军
• 机 构: 解放军第81医院肿瘤外科,上海第二军医大学附属长海医院普通外科,东方肝胆医院病毒基因治疗实验室
• 出 处: 生物学杂志
• 发表日期: 2008年6期
• 关键词: 白细胞介素-12 米非司酮 诱导表达 融合基因 interleukin-12 mifepristone inducible expression fusion
• 基金项目: 国家自然科学基金资助（项目批号：30571830）

构建含有单链鼠白细胞介素12（mIL-12）基因，并可经米非司酮调控表达的真核载体，在体外鉴定其调控表达效果。用PCR技术从GCp35Ep40PN质粒上获取白细胞介素12的p40和p35亚基的基因，通过2次PCR技术引入linker后得到单链白细胞介素12基因，将其与米非司酮诱导调控系统克隆入pDC312质粒，构建成真核表达载体pDC-RUmIL-12，通过限制性内切酶和PCR鉴定其正确性。在体外用脂质体转染法将pDC-RUmIL-12载体转染HEK293细胞株，以不同的剂量米非司酮诱导载体表达，然后用E