【摘 要】
：
目的:构建并鉴定心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体(MHC-EGFP),该基因只在心肌中特异性表达.方法:设计5'和3'分别具有SalI/HindⅢ酶切位点的EGFP引物,聚合
【机 构】
：
郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,Cardiovascular Research Institute
论文部分内容阅读
目的:构建并鉴定心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体(MHC-EGFP),该基因只在心肌中特异性表达.方法:设计5'和3'分别具有SalI/HindⅢ酶切位点的EGFP引物,聚合酶链反应法(PCR)从pLEGFP质粒中扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的cDNA,插入pGEM-T Easy载体表达盒,构建pGEM-EGFP,SalI/HindⅢ双酶切后回收729 kb片断,插入经相同酶切的含5.5 kb心肌特异性α肌球蛋白重链启动子的pNC26质粒,构建pMHC-EGFP.连接产物转化感受态DH5α,挑选克隆,PCR扩增鉴定,重组质粒经NotI酶切,回收7.2 kb MHC-EGFP表达盒.分离培养小鼠心肌细胞与骨骼肌成肌细胞.MHC-EGFP表达盒通过脂质体法分别转染心肌与骨骼肌成肌细胞.荧光显微镜观察转染细胞是否出现绿色荧光,以鉴定MHC-EGFP表达盒是否具有表达特异性.结果:EGFP cDNA正确插入pNC26质粒中αMHC启动子3'端.成功转染MHC-EGFP表达盒的心肌细胞出现绿色荧光,而转染的骨骼肌成肌细胞无荧光出现.结论:MHC-EGFP表达盒具有心肌特异性表达特性,为进一步监测干细胞向心肌分化研究奠定基础.
其他文献
产业集聚是造成城市生态环境破坏的主要原因之一,从长远来看,环境保护对经济发展必然产生正面影响,调整产业集聚与环境保护之间的矛盾,完善环境保护的法律规则应当设定严格的
目的探讨高功率微波(HPM)辐照后大鼠睾丸组织γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1(IL-1)的表达及其意义.方法110只二级雄性Wistar大鼠经0、3、10和30 mW/c
目的对MⅡ期水牛卵母细胞进行人工诱导激活,可以间接判断体外成熟卵母细胞质量的优劣,并且,卵母细胞的充分激活也是提高核移植效率的关键因素之一.比较了水牛卵母细胞体外成
采用排油圈、血平板等几种方法从青海花土沟油田分离出4株产生物表面活性剂菌,通过L16(45)正交实验,找出最佳菌种和最佳培养基,最佳产表面活性剂菌为BIOS682。BIOS682经16SrD
水资源是生命之源，也是当今世界最重要的战略资源之一，水资源已经成为限制一个地区经济和农业发展的重要因素。我国是人口和农业大国，水资源匮乏一直是国家关注的重点和难点，提倡
本文通过对白云山生态资源发展现状的分析，提出了白云山生态资源发展的对策和建议，以期使白云山的生态资源得以保护和永续利用。
术后苏醒期管理是麻醉技术自然而必要的延续.如果处理不当,则会延长动物的麻醉苏醒时间,将加剧和延长动物手术所致代谢紊乱,甚至导致死亡.术后麻醉苏醒期的管理,包括特殊护理
本文采用罗克韦尔 SLC 500系列可编程控制器（PLC）作为排烟风机冷却循环水系统的控制器，这种控制器具有通用性好，控制方式灵活，编程简单，抗干扰能力强等特点。本文介绍了冷却水控制
实验动物手术台是指用于固定或支撑动物并对动物实施解剖、手术的工作台及其辅助装置.它主要由台面、支架、固定装置、抽屉(物品箱)、机械或电控装置等部件构成.其大小、规格
讨论了以黑曲霉脂肪酶为催化剂,以抗坏血酸和棕榈酸甲酯为底物的酯交换反应及其影响因素.考察了在摇床速度为200r/min,叔丁醇为溶剂下,底物的摩尔比、温度、脂肪酶浓度、时间