【摘 要】
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目的:以地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶基因(amyL)为报告基因,构建含不同启动子的枯草杆菌表达载体,转化枯草杆菌,并对重组菌的酶活进行分析,比较不同启动子对amyL基因在枯草杆菌
【机 构】
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江南大学生物工程学院生物资源与生物能源研究中心
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划项目(No.2006AA020204)资助
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目的:以地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶基因(amyL)为报告基因,构建含不同启动子的枯草杆菌表达载体,转化枯草杆菌,并对重组菌的酶活进行分析,比较不同启动子对amyL基因在枯草杆菌中表达的影响。方法:以高温α-淀粉酶高产菌株B.licheniformis0204染色体DNA为模板,PCR扩增得到amyL并分别与PQ启动子和P43启动子进行连接构建表达载体pUB-PQ-amyL和pUB-P43-amyL,化学法转化枯草杆菌1A717,筛选得到重组转化子后对重组菌的表达产物进行SDS-PAGE和酶活检测。结果:重组菌摇瓶发酵105h后测定高温α-淀粉酶酶活,B.subtilis1A717(pUB-PQ-amyL)的最高酶活为280.1U/mL,B.subtilis1A717(pUB-P43-amyL)的最高酶活为190.5U/mL。结论:PQ启动子调控的高温α-淀粉酶最高表达水平是P43启动子调控的最高表达水平的1.47倍,说明PQ启动子能使amyL基因在枯草杆菌中更高效地表达。
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