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【摘 要】建立反相高效液相色谱法测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（ 85：15：0.01），检测波长为225nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。氨苄西林钠在20～160μg·mL-1，氯唑西林钠在25-200μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。氨苄西林钠和氯唑西林钠平均回收率分别为99.56%、99.63%。结论：本法简便、准确，可用于注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量测定。
【关键词】注射用氨苄西林钠氯唑西林钠；含量；测定
注射用氨苄西林钠氯唑西林钠属注射剂。注射用氨苄西林钠氯唑西林钠为复方制剂，其组份为氨苄西林钠，氯唑西林钠。射用氨苄西林钠氯唑西林钠既对革兰阳性菌和阴性菌有广谱灭杀作用，又对耐青霉素的金黄色葡萄球菌有效。注射用氨苄西林钠氯唑西林钠适用于敏感菌所致的呼吸道感染、心内膜炎、脑膜炎、胃肠道感染、尿路感染、败血症等。本文采用高效液相法对注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中的氨苄西林钠和氯唑西林钠的进行了含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器
安捷伦1100高效液相色谱仪、安捷伦色谱工作站、安捷伦1100可变波长检测器、赛多利斯BPZn-D分析天平、Kertone实验室超纯水机（科尔顿（中国）有限公司）、KQ-300VDE型双频数控超声波清洗器、pHS-2C型精密酸度计（上海精科雷磁厂）、HH-4数显电子恒温水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）、TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2色谱柱
奥泰公司C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品
氨苄西林钠和氯唑西林钠 购自中国药品生物制品检定所。
1.4试剂
甲醇（吉林市融信化工有限公司）、磷酸（济南世纪通达化工有限公司）、三乙胺（上海谱振生物科技有限公司）、磷酸二氢钾（济南世纪通达化工有限公司）。
1.5试药
注射用氨苄西林钠氯唑西林钠
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-12]。流动相：磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01），检测波长：225nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：35℃。理论板数按氨苄西林钠和氯唑西林钠峰计算应不得低于3000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相分别制成每1mL含50μg、50μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取供试品精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.4精密度试验
精密称取氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为50μg·mL-1、50μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%、RSD=0.61%，表明本方法精密度良好。
2.5对照品的线性考察
精密称取氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品40mg、50mg，置20ml容量瓶中，加入流动相溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1、2、4、6、8mL，置于10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，氨苄西林钠在20～160μg·mL-1，氯唑西林钠在25-200μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6重现性试验
称取同一批的注射用氨苄西林钠氯唑西林钠样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.95%和0.83%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率分别为99.56%、99.63%，RSD为0.66%，0.86%。
2.8样品稳定性试验
取同一批注射用氨苄西林钠氯唑西林钠样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8、10小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的RSD=0.52%和 RSD=0.55%。结果表明供试品10小时内稳定。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠三批样品中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量，结果三批样品的含量分别为44.5%、44.6%、44.6%，44.3%、44.4%、44.5%。
3.讨论
分别考察磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（80：20：0.01）；磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-三乙胺（85：15：0.01）；甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶0.1），磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01），甲醇-水（40∶60）不同比例的流动相，结果以磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01）为流动相。本实验表明此方法可用于注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量测定。注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量为不低于44.0%。
【参考文献】
[1]胡毅坚，吴春芬.高效液相色谱法测定复方地塞米松霜中2组分的含量[J].中国药房，2006（20）.
[2]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（01）.
[3]温海波，杨光.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].华章，2011（06）.
[4]孙昌友，苏畅，李荣英.高效液相色谱法测定不同厂家注射用氨苄西林钠/舒巴坦钠的含量[J].山西医药杂志，2009（07）.
[5]余俊，李菁，欧阳素英，侯飞燕.反相高效液相色谱法同时测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中2组分的含量[J].中国药房，2007（04）.
[6]张利斌，张晓庆，刘明忠.注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠与不同溶媒配伍稳定性的研究[J].药学实践杂志，2006（02）.
[7]熊百莉，杨玉琴.注射用氯唑西林钠与利巴韦林注射液配伍的稳定性[J].中国医院药学杂志，2009（11）.
[8]苏蕊，刘磊.氨苄西林钠氯唑西林钠含量测定方法研究[J].黑龙江科技信息，2010（09）.
[9]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（01）.
[10]谭泽慧，刘尧.注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量测定[J].黑龙江医药，2009（04）.
[11]周明昊，胡楚楚.反相高效液相色谱梯度洗脱法测定注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质[J].中国抗生素杂志，2009（03）.
[12]邢亮彬，张菁，高燕霞.HPLC法测定注射用氟氯西林钠氨苄西林钠的含量及有关物质[J].中国抗生素杂志，2006（07）.
【关键词】注射用氨苄西林钠氯唑西林钠；含量；测定
注射用氨苄西林钠氯唑西林钠属注射剂。注射用氨苄西林钠氯唑西林钠为复方制剂，其组份为氨苄西林钠，氯唑西林钠。射用氨苄西林钠氯唑西林钠既对革兰阳性菌和阴性菌有广谱灭杀作用，又对耐青霉素的金黄色葡萄球菌有效。注射用氨苄西林钠氯唑西林钠适用于敏感菌所致的呼吸道感染、心内膜炎、脑膜炎、胃肠道感染、尿路感染、败血症等。本文采用高效液相法对注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中的氨苄西林钠和氯唑西林钠的进行了含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器
安捷伦1100高效液相色谱仪、安捷伦色谱工作站、安捷伦1100可变波长检测器、赛多利斯BPZn-D分析天平、Kertone实验室超纯水机（科尔顿（中国）有限公司）、KQ-300VDE型双频数控超声波清洗器、pHS-2C型精密酸度计（上海精科雷磁厂）、HH-4数显电子恒温水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）、TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2色谱柱
奥泰公司C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品
氨苄西林钠和氯唑西林钠 购自中国药品生物制品检定所。
1.4试剂
甲醇（吉林市融信化工有限公司）、磷酸（济南世纪通达化工有限公司）、三乙胺（上海谱振生物科技有限公司）、磷酸二氢钾（济南世纪通达化工有限公司）。
1.5试药
注射用氨苄西林钠氯唑西林钠
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-12]。流动相：磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01），检测波长：225nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：35℃。理论板数按氨苄西林钠和氯唑西林钠峰计算应不得低于3000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相分别制成每1mL含50μg、50μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取供试品精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.4精密度试验
精密称取氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为50μg·mL-1、50μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%、RSD=0.61%，表明本方法精密度良好。
2.5对照品的线性考察
精密称取氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品40mg、50mg，置20ml容量瓶中，加入流动相溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1、2、4、6、8mL，置于10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，氨苄西林钠在20～160μg·mL-1，氯唑西林钠在25-200μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6重现性试验
称取同一批的注射用氨苄西林钠氯唑西林钠样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.95%和0.83%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的氨苄西林钠和氯唑西林钠对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率分别为99.56%、99.63%，RSD为0.66%，0.86%。
2.8样品稳定性试验
取同一批注射用氨苄西林钠氯唑西林钠样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8、10小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的RSD=0.52%和 RSD=0.55%。结果表明供试品10小时内稳定。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠三批样品中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量，结果三批样品的含量分别为44.5%、44.6%、44.6%，44.3%、44.4%、44.5%。
3.讨论
分别考察磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（80：20：0.01）；磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-三乙胺（85：15：0.01）；甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶0.1），磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01），甲醇-水（40∶60）不同比例的流动相，结果以磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用磷酸盐缓冲液磷酸-甲醇-磷酸（85：15：0.01）为流动相。本实验表明此方法可用于注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量测定。注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林钠和氯唑西林钠的含量为不低于44.0%。
【参考文献】
[1]胡毅坚，吴春芬.高效液相色谱法测定复方地塞米松霜中2组分的含量[J].中国药房，2006（20）.
[2]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（01）.
[3]温海波，杨光.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].华章，2011（06）.
[4]孙昌友，苏畅，李荣英.高效液相色谱法测定不同厂家注射用氨苄西林钠/舒巴坦钠的含量[J].山西医药杂志，2009（07）.
[5]余俊，李菁，欧阳素英，侯飞燕.反相高效液相色谱法同时测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中2组分的含量[J].中国药房，2007（04）.
[6]张利斌，张晓庆，刘明忠.注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠与不同溶媒配伍稳定性的研究[J].药学实践杂志，2006（02）.
[7]熊百莉，杨玉琴.注射用氯唑西林钠与利巴韦林注射液配伍的稳定性[J].中国医院药学杂志，2009（11）.
[8]苏蕊，刘磊.氨苄西林钠氯唑西林钠含量测定方法研究[J].黑龙江科技信息，2010（09）.
[9]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（01）.
[10]谭泽慧，刘尧.注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量测定[J].黑龙江医药，2009（04）.
[11]周明昊，胡楚楚.反相高效液相色谱梯度洗脱法测定注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质[J].中国抗生素杂志，2009（03）.
[12]邢亮彬，张菁，高燕霞.HPLC法测定注射用氟氯西林钠氨苄西林钠的含量及有关物质[J].中国抗生素杂志，2006（07）.