【摘 要】
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目的 构建含有幽门螺杆菌尿素酶(ureI、ureβ)及霍乱毒素B亚单位(ctB)融合片段的多表位疫苗工程菌,并研究其微生物学特性.方法 通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选出T
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室 成都610041;四川万可泰生物技术有限责任公司 成都610041
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目的 构建含有幽门螺杆菌尿素酶(ureI、ureβ)及霍乱毒素B亚单位(ctB)融合片段的多表位疫苗工程菌,并研究其微生物学特性.方法 通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选出T细胞和B细胞优势表位,通过柔性Linker相连,并在其N端加入分子内佐剂序列ctB,按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化,即为BIB序列.人工合成之后,插入原核表达质粒pET28a(+)中,构建pET28a(+)/ctB-ureI-ureB[pET28a(+)/BIB]重组质粒.经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定正确后,将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中.BIB工程菌经乳糖诱导表达后,SDS-PAGE检测重组蛋白BIB的表达情况,并对其N端氨基酸序列和相对分子质量进行测定,West blot对其进行抗原性鉴定.结果 原核表达质粒pET28a(+)/BIB经双酶切和测序鉴定构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量33×103处有一条明显条带,其N端氨基酸序列和相对分子质量与设计序列100％一致,West blot结果显示BIB可以与抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应.结论 成功构建了幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌,该工程菌表达的BIB蛋白抗原性良好.
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