【摘 要】
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蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒（CCV）、猫冠状病毒（FCV）和猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）的细胞培养物，分别设计7、17、11对引物，对病毒RNA进行反转录和PCR扩增，回收PCR产物连接pGEM—
【机 构】
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上海出入境检验检疫局,上海大学生命科学学院,中国农业科学院上海兽医研究所
【基金项目】
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国家“863”计划“功能基因组与生物芯片”资助项目(2003AA2Z2060)
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蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒（CCV）、猫冠状病毒（FCV）和猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）的细胞培养物，分别设计7、17、11对引物，对病毒RNA进行反转录和PCR扩增，回收PCR产物连接pGEM—T载体并转化大肠杆菌TGI，构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA，回收PCR扩增产物，点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA，利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记，与芯片进行杂交检测，淘汰交叉的克隆片段，每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片，与
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