【摘 要】
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目的:探究微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/R)中的作用及机制.方法:建立小鼠小胶质细胞系EOC 13.31的OGD/R模型.将miR-146b-5p模拟物、miR-146b-5p抑制剂及相应的阴性对照,分别转染至EOC 13.31细胞中,然后再分别进行OGD/R处理,分别命名为OGD/R+miR-146b-5p mimic 组、OGD/R+miR-146b-5p inhibitor 组、OGD/R+NC mimic 组和OGD/R+NC inhi
【机 构】
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三峡大学神经病学研究所,宜昌443002;宜昌市中心人民医院,宜昌443003
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目的:探究微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/R)中的作用及机制.方法:建立小鼠小胶质细胞系EOC 13.31的OGD/R模型.将miR-146b-5p模拟物、miR-146b-5p抑制剂及相应的阴性对照,分别转染至EOC 13.31细胞中,然后再分别进行OGD/R处理,分别命名为OGD/R+miR-146b-5p mimic 组、OGD/R+miR-146b-5p inhibitor 组、OGD/R+NC mimic 组和OGD/R+NC inhibitor 组,以常规培养的细胞为对照组(Control组),只行OGD/R处理的细胞为OGD/R组,48h后检测相关指标.实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-146b-5p表达;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测TRAF6蛋白表达;生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析miR-146b-5p和TRAF6之间的关系.结果:与Control组相比,OGD/R组中miR-146b-5p表达显著下调(P＜0.01),TRAF6蛋白表达显著上调(P＜0.01).与OGD/R+NC mimic组比较,OGD/R+miR-146b-5p mimic组细胞存活率显著增高,凋亡率显著降低,MDA含量显著降低,SOD、CAT含量显著增高,TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著降低,含TRAF6-WT的荧光素酶活性显著降低,TRAF6蛋白表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01).与OGD/R+NC inhibitor组比较,OGD/R+miR-146b-5p inhibitor组细胞的存活率显著降低,凋亡率显著升高,MDA含量显著增高,SOD、CAT含量显著降低,TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著升高,TRAF6蛋白表达显著增加(P＜0.05或P＜0.01).结论:miR-146b-5p通过靶向TRAF6促进小胶质细胞OGD/R模型细胞存活,抑制细胞凋亡,减轻氧化应激和炎症反应.
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