实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞受照后GADD45基因表达的改变

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目的 建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表迭变化作为辐射生物剂量计的可行性.方法 健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测CADD45基因经不同剂量照射(0~8 Gy)、2 Gy照后不同时间(0~72 h)的mRNA表达水平,以管家基因GAPDH为内参进行定量分析.结果 照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,4 Gy照射时达到峰值,8 Gy仍然保持在较高水平,GADD45基因表达改变存在线性剂量-效应关系,其线性回归方程为y=3.408+1.528x,R2=0.787.2 Gy照射后GADD45基因mRNA表达在照射后1 h呈现上升趋势,在4 h时迭峰值,照射后72 h基因表达仍未恢复到初始水平.结论 实时荧光定量PCR检测GADD45基因表达方法具有良好的敏感性、重复性和剂量一效应关系,有可能成为新的辐射生物剂量计.
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