线粒体基质蛋白Hsp70、Hsp60的表达、纯化、鉴定及抗体制备

• 作 者: 程晓丽 李春燕 连建华 齐华 刘永波
• 机 构: 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室,北华大学医学院附属医院手外科
• 出 处: 郑州大学学报：医学版
• 发表日期: 2006年6期
• 关键词: 线粒体基质蛋白 热休克蛋白 表达 纯化 Western-blot分析 抗体 mitochondrial matrix protein heat shock
• 基金项目: 河南省及郑州大学“0DA”贷款资助项目

目的：建立有效的线粒体基质蛋白Hsp70、Hsp60原核细胞表达系统，获得纯度较高的Hsp70、Hsp60蛋白，并制备抗体。方法：以HeLa细胞cDNA为模板扩增成熟的hsp70、hsp60 DNA，插入pPRO—EX—HTb质粒，IPTG诱导B21 E．coli表达，Ni^2＋离子螯合树脂纯化蛋白，获取被免疫的免抗血清，纯化后进行Western—blot鉴定。结果与结论：成功构建Hsp70、Hsp60高效原核表达系统并获得特异性较好的抗体，为进一步研究线粒体基质蛋白的功能奠定了基础。