【摘 要】
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本研究建立了一种能够快速、灵敏地检测来源于铜绿假单胞菌GF31中拟除虫菊酯降解酶基因APs的SYBR GreenⅠ相对实时荧光定量PCR方法。通过克隆构建APs目的基因及16S rRNA内参
【机 构】
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广西大学化学化工学院; 广西生物炼制重点实验室; 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(21276053);广西自然科学基金(2016GXNSFAA380302)共同资助
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本研究建立了一种能够快速、灵敏地检测来源于铜绿假单胞菌GF31中拟除虫菊酯降解酶基因APs的SYBR GreenⅠ相对实时荧光定量PCR方法。通过克隆构建APs目的基因及16S rRNA内参基因重组质粒,分别制备了质粒标准品SgI-pET30a、PA-pET30a、Pep-pET30a以及16S r RNA-p ET30a;绘制标准曲线,建立了实时荧光定量PCR体系。结果显示,在质粒标准品浓度为0.00110 ng范围内,实时定量PCR标准曲线的线性关系良好,APs和16S r RNA的标准曲线R2>0.99,扩增效率=95%105%;熔解曲线呈单峰,特异性良好;扩增曲线呈S型,CT值在各梯度间均匀变化、重复性好;将建立的相对实时荧光定量PCR方法应用于检测工程菌及野生菌APs基因的m RNA表达水平,2-△△Ct法计算得工程菌SgI、PA及Pep的表达量分别为野生菌的1 898、1 314和956倍。
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