利用Pyrobest DNA聚合酶一步法进行大片段基因的定点突变

• 作 者: 朱大兴 周清华 王艳萍 车国卫 唐小军 朱文 陈小禾 孙芝琳
• 机 构: 天津医科大学总医院,天津医科大学总医院,四川大学华西医院四川省肺癌分子生物学重点实验室
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2007年4期
• 关键词: Pyrobest DNA聚合酶 定点突变 PCR Pyrobest DNA polymerase site-directed mutagenesis PCR
• 基金项目: 国家自然科学基金重点项目（30430300）,教育部高等学校博士学科点专项科研基金（20040610060）

目的：介绍一种简单、快速、高效和经济的进行大片段基因定点突变的方法。方法：小量抽提含有NM23H1-EGFP融合基因的逆转录病毒真核表达质粒pLXSN-NM23Hl-EGFP，体外合成突变引物对，利用高保真PyrobestDNA聚合酶对质粒DNA进行PCR突变反应，然后用Dpn I限制性内切酶消化PCR产物以去除模板DNA，取适量消化产物转化大肠杆菌XLl-Blue，随机挑选克隆进行测序筛选、鉴定所需突变株。结果：在NM23H1-EGFP基因中引入了S44A、P96S、H118F、S120G、P96S-S